重組人肝再生增強(qiáng)因子的純化、鑒定和活性研究.pdf

1、肝炎、肝硬化等肝臟疾病嚴(yán)重危害人類健康。近年來，體外和體內(nèi)的動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，存在于肝細(xì)胞胞漿中的一種細(xì)胞因子-肝再生增強(qiáng)因子(ALR)具有顯著促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的作用，因此人們認(rèn)為肝再生增強(qiáng)因子極有希望被開發(fā)成為治療嚴(yán)重肝病的藥物。 本研究對(duì)基因工程菌株pJL3-pET22b-rhALR/BL21-GOLD(DE3)分泌表達(dá)的S-rhALR(存在于周質(zhì)中)進(jìn)行了分離純化工藝的研究。通過對(duì)菌體破壁、鹽沉淀和各種色譜條件的實(shí)驗(yàn)，確定了

2、菌體超聲破壁、離心、40﹪(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀、上清液Butyl Sepharose Fast Flow疏水色譜、透析、CMSepharose Fast Flow陽離子色譜、濃縮、Superdex-75分子篩色譜的蛋白純化工藝，并得到了純品。 對(duì)基因工程菌株pET22b-rhALR/BL21-GOLD(DE3)表達(dá)的IB-rhALR(表達(dá)為包涵體)進(jìn)行了復(fù)性和純化工藝的研究。確定了菌體破壁獲取包涵體、包涵體裂

3、解、裂解液Q Sepharose Fast Flow陰離子色譜、復(fù)性、復(fù)性液CM Sepharose Fast Flow陽離子色譜、濃縮、Superdex-75分子篩色譜的復(fù)性分離工藝，并得到了純品。 分析結(jié)果顯示，S-rhALR和IB-rhALR純度均達(dá)到了95﹪以上，且以均一的二聚體形式存在，兩者N端15個(gè)氨基酸殘基序列相同并與其cDNA推導(dǎo)序列完全一致，對(duì)從人胎肝提取物的抗血清具有免疫源性。S-rhALR結(jié)合輔酶FAD，而