99Tcm標(biāo)記抗胃泌素釋放肽前體單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：
　　 1．研究抗胃泌素釋放肽前體(pro-gastrin-releasing peptide(31-98) ProGRP(31-98))單克隆抗體D-D3的99Tcm標(biāo)記方法、標(biāo)記抗體的穩(wěn)定性及免疫活性。
　　 2．研究99Tcm-D-D3在正常ICR小鼠及人小細(xì)胞肺癌荷瘤裸鼠模型體內(nèi)的分布情況，探討99Tcm-D-D3在小鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過程。
　　 3．研究99Tcm-D-D3對(duì)不同類型腫瘤的放射

2、免疫顯像效果。
　　 研究方法：
　　 1．通過免疫組化法檢測(cè)人小細(xì)胞肺癌、宮頸癌、胃癌及肺腺癌組織中ProGRP的表達(dá)情況。
　　 2．采用2-巰基乙醇還原法制備標(biāo)記99Tcm-D-D3;凝膠柱分離法純化標(biāo)記產(chǎn)物；紙層析法檢測(cè)標(biāo)記率、放化純；將99Tcm-D-D3分別與生理鹽水及正常人血清混合后置于370C水浴箱，分別在不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定放化純以了解其穩(wěn)定性；利用細(xì)胞結(jié)合分析法測(cè)定99Tcm-D-D3的免疫活性。<

3、br>　　 3．自正常ICR小鼠尾靜脈注射99Tcm-D-D3后，分別子不同時(shí)間點(diǎn)采取頸椎脫臼法處死小鼠，同時(shí)取血液及各主要臟器組織標(biāo)本，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的每克組織注射百分劑量率（％ID/g）。建立人小細(xì)胞肺癌、宮頸癌、胃癌及肺腺癌荷瘤裸鼠模型，采用同樣方法，自荷瘤裸鼠尾靜脈注射99Tcm-D-D3后于不同時(shí)間點(diǎn)處死荷瘤裸鼠，同時(shí)取血液及各主要臟器組織標(biāo)本，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的%ID/g和瘤體／非瘤體組織放射性計(jì)數(shù)(T/NT)比值。
　　

4、 4．對(duì)人小細(xì)胞肺癌、宮頸癌、胃癌和肺腺癌荷瘤裸鼠模型進(jìn)行99Tcm-D-D3放射免疫顯像，觀察不同類型移植瘤的顯像情況，利用ROI技術(shù)在顯像圖上勾畫移植瘤輪廓并計(jì)算瘤體與對(duì)側(cè)相同部位的T/B比值。
　　 研究結(jié)果：
　　 1．免疫組化法檢測(cè)顯示人小細(xì)胞肺癌、宮頸癌及胃癌組織切片中有明顯的棕黃色顆粒在腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi)分布，而肺腺癌組織切片中未見明顯染色陽(yáng)性細(xì)胞。
　　 2.99Tcm-D-D3標(biāo)記率為73.87

5、±2.89%，放化純?yōu)?4.13±4.49%；與生理鹽水混合在37℃水浴箱放置4h后99Tcm-D-D3放化純?yōu)?2.17±1.00%，12h后放化純?yōu)?5.73±1.07%；與正常人血清充分混合在37℃水浴箱放置4h后99Tcm-D-D3放化純?yōu)?4.13±1.67%，12h后放化純?yōu)?4.07±1.88%;99Tcm-D-D3對(duì)NCI-H446和A549細(xì)胞株的免疫結(jié)合率分別為81.2±2.37%、24.3±1.46%。
　　

6、 3.99Tcm-D-D3在正常ICR小鼠及人小細(xì)胞肺癌荷瘤裸鼠體內(nèi)過程符合抗體在機(jī)體內(nèi)的一般代謝分布規(guī)律。主要通過肝臟、腎臟代謝，血液清除速度較快，肌肉及腦組織攝取不明顯。注射12h后移植瘤體的%ID/g高于其它臟器及組織，24h時(shí)達(dá)到最高值0.41±0.04%，T/NT比值隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸升高，至注射24h時(shí)瘤／肌肉的T/NT比值最大達(dá)13.67±5.03。
　　 4．放射免疫顯像結(jié)果顯示，隨時(shí)間延長(zhǎng)人小細(xì)胞肺癌荷瘤裸鼠移

7、植瘤部位放射性濃聚程度逐漸增強(qiáng)，24h時(shí)99Tcm-D-D3聚集最為明顯。肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤部位未見明顯99Tcm-D-D3聚集。宮頸癌及胃癌荷瘤裸鼠顯像結(jié)果和人小細(xì)胞肺癌荷瘤裸鼠顯像結(jié)果類似，但肉眼觀察移植瘤部位濃聚99Tcm-D-D3程度明顯低于人小細(xì)胞肺癌荷瘤裸鼠。人小細(xì)胞肺癌裸鼠模型各時(shí)間點(diǎn)T/B比值均高于宮頸癌及胃癌裸鼠模型，三者又均明顯高于肺腺癌裸鼠模型。
　　 結(jié)論：
　　 1.99Tcm-D-D3放化純