血清肝細(xì)胞生長因子在大腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中的臨床價(jià)值.pdf

1、大腸癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，每年全世界約有50萬人發(fā)病，在西方國家大腸癌死亡率僅次于肺癌和乳腺瘤，居惡性腫瘤死亡率第3位。近年來我國大腸癌發(fā)病率及死亡率亦呈升高趨勢(shì)，據(jù)1993～1997年中國1/10人口死因抽樣調(diào)查結(jié)果[2]顯示，中國大腸癌居惡性腫瘤死因第五位。在臨床就診的大腸癌病人，其中約1/3病人在就診時(shí)腫瘤已至晚期不能切除或有彌漫性轉(zhuǎn)移，這類病人預(yù)后很差，平均生存期約7個(gè)月。而另外2/3的病人即使對(duì)原發(fā)腫瘤能行“根治性切除

2、”，但仍約50%的病人生存期不超過5年，其中大部分（約占40%）患者死于肝轉(zhuǎn)移。如何早期預(yù)測大腸癌的轉(zhuǎn)移，一直是醫(yī)學(xué)界十分關(guān)注的問題。 肝細(xì)胞生長因子（hepatocytegrowthfactor，HGF）是一種多功能的細(xì)胞因子，有研究表明，HGF能調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)多種細(xì)胞組織形態(tài)的發(fā)生，是上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞相互作用的體液介質(zhì)，具有強(qiáng)大的促分裂、組織形成、誘導(dǎo)上皮遷移、侵襲以及誘發(fā)血管生成的作用。在腫瘤細(xì)胞中HGF和c-

3、met結(jié)合導(dǎo)致受體自身磷酸化，增強(qiáng)了酪氨酸激酶的活性，導(dǎo)致多種底物蛋白的酪氨酸磷酸化。由于腫瘤組織中HGF和c-met的同時(shí)高表達(dá)，形成正反饋，導(dǎo)致腫瘤的無限生長和侵襲行為。而這種正反饋?zhàn)饔靡呀?jīng)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、骨肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤等惡性腫瘤中得到證實(shí)，并顯示HGF在惡性腫瘤體液中顯著升高，并與侵襲狀態(tài)密切相關(guān)。 國內(nèi)外雖已有許多學(xué)者就HGF在各類惡性腫瘤方面進(jìn)行了研究，但大多僅限于組織中的研究。如國內(nèi)謝倩、羅運(yùn)權(quán)等通過檢測

4、肝癌組織中HGF及其受體的表達(dá)，認(rèn)為HGF與肝癌的轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。EichbaumMH等報(bào)道了原發(fā)乳腺癌組織中HGF濃度是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。 近幾年來對(duì)于血清中HGF含量的研究也越來越多，Tanaka等的研究表明，早期胃癌和進(jìn)展期胃癌患者的血清HGF顯著高于正常對(duì)照組，提示在早期胃癌和進(jìn)展期胃癌中，血清HGF水平可能是一個(gè)有臨床價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物。國內(nèi)尹家俊等也報(bào)道了乳腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移組的血清HGF濃度顯著高于無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組及對(duì)照組。

5、國外雖已有學(xué)者針對(duì)血清中HGF水平與大腸癌分期的關(guān)系進(jìn)行了研究，但就大腸癌肝轉(zhuǎn)移方面的研究仍局限在組織中，特別是在血清中的表達(dá)情況的研究仍是甚少。 目的：鑒于目前診斷大腸癌是否有肝轉(zhuǎn)移的存在，大多是依靠影像學(xué)如B超、CT或MR，以及術(shù)后或治療后血清CEA是否升高等來確定。而臨床上，當(dāng)影像學(xué)已有診斷時(shí)，病情往往已進(jìn)入晚期，給臨床治療已帶來了一定的困難，而且患者的預(yù)后也已較差。所以，目前臨床上通常采取大腸癌術(shù)后肝臟介入化療來預(yù)防肝轉(zhuǎn)

6、移的可能性。因此，如何能早期預(yù)測大腸癌是否具有發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的可能性，對(duì)提高大腸癌預(yù)后的預(yù)測和指導(dǎo)更有效的治療方法都有著重要的意義。 本研究以52例大腸癌患者為研究對(duì)象，應(yīng)用雙抗體夾心法ELISA對(duì)大腸癌患者血清中肝細(xì)胞生長因子的測定，來分析其與大腸癌發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系，試圖探討HGF對(duì)判斷肝轉(zhuǎn)移的價(jià)值。 方法：自2004年6月至2006年12月選擇病例52例，均為大腸癌患者，且所有患者均經(jīng)過病理證實(shí)，其中男、女之比為27：2

7、5，年齡31～75歲，平均年齡54.17歲。在52例患者中，根據(jù)Duke's分期，分為A和B期13例、C期17例、D期22例，此D期的22例中，17例合并有肝轉(zhuǎn)移（均有影像學(xué)診斷），5例為其他部位轉(zhuǎn)移（無肝臟轉(zhuǎn)移）。另設(shè)健康對(duì)照20例（均來自于我院體檢科健康體檢人群），年齡25歲～72歲，平均40.3歲，男女之比為13：7。 取受檢患者新鮮血10ml，立即于4℃300rmin離心15min，取上清液1ml分裝后置-70℃深低溫冰

8、箱凍存?zhèn)溆弥翜y定。 實(shí)驗(yàn)方法按照購自廣州康潤公司的人HGF檢測試劑盒（美國RD公司產(chǎn)品，標(biāo)號(hào)：063402）上說明書的操作步驟進(jìn)行檢測。具體測定步驟為：（1）取樣品室溫解凍；（2）雙蒸水稀釋洗滌液至500ml校準(zhǔn)稀釋液倍比稀釋HGF標(biāo)準(zhǔn)品濃度至8000μg/L；（3）分別加入5μl標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）、5μl已稀釋血清或血漿于反應(yīng)板孔中，輕輕混勻10s；（4）每孔加入200μlBiotinantiHGF，輕輕混勻30s，

9、37℃溫育30min；（5）洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應(yīng)板，并去除水滴（在厚疊吸水紙上拍干），這樣反復(fù)洗滌5次；（6）每孔加入200μlHRP，輕輕混勻10s，37℃溫育30min；（7）洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應(yīng)板，并去除水滴（在厚疊吸水紙上拍干），這樣反復(fù)洗滌5次；（8）每孔加入100μlTMB顯色液，輕輕混勻10s，置暗處室溫溫育20min；（9）每孔加入100μl終止液（StopSolution），輕輕混勻30

10、s；15min內(nèi)在酶標(biāo)儀中以450nm處讀光密度值，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出各樣本HGF含量。我們將所有數(shù)據(jù)輸入SPSS13.0軟件包進(jìn)行處理，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和One-WayANOVA檢驗(yàn)，其中P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著差異。 結(jié)果： 一、血清HGF值在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間的比較。 所有研究對(duì)象在入選時(shí)均確診為大腸癌，并均有病理證實(shí)。同時(shí)選擇20例健康體檢者作為對(duì)照組進(jìn)行檢測。并且將檢測結(jié)果分別輸入SPSS1

11、3.0軟件包內(nèi)進(jìn)行計(jì)算和分析。通過檢查發(fā)現(xiàn)，大腸癌患者血清中HGF的含量普遍較高，實(shí)驗(yàn)組與健康對(duì)照組之間存在著顯著的差異（P<0.005），說明大腸癌患者的血清中HGF的含量遠(yuǎn)高于健康人群。 一、有肝轉(zhuǎn)移和無肝轉(zhuǎn)移兩組之間的比較。 將所有研究對(duì)象，通過各項(xiàng)檢查，包括BUS、CT等檢查，區(qū)分為有肝轉(zhuǎn)移和無肝轉(zhuǎn)移兩組，并分別把數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，通過分析發(fā)現(xiàn)，有肝轉(zhuǎn)移組其HGF的含量要遠(yuǎn)高于無肝轉(zhuǎn)移組患者（P<0.005）。

12、從檢驗(yàn)中我們還發(fā)現(xiàn)，除了有肝轉(zhuǎn)移的患者血清中HGF含量較高外，其他部位轉(zhuǎn)移的大腸癌患者，其血清中HGF的含量也遠(yuǎn)高于無轉(zhuǎn)移組的患者。說明除了肝臟在受到損害時(shí)，自身會(huì)釋放肝細(xì)胞生長因子外，原發(fā)腫瘤本身在瘤細(xì)胞脫落時(shí)，也可以分泌該因子。 三、血清中HGF的含量與大腸癌分期的關(guān)系。 正如與有、無肝轉(zhuǎn)移分組一樣，我們將患者按照Duck分期方法，將患者分成Ⅵ個(gè)期別，從實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也可以發(fā)現(xiàn)，血清中HGF的含量與大腸癌的分期也有著密切

13、的關(guān)系，而且分期越晚，血清中HGF的含量就越高（P<0.005）。由此可以看出，大腸癌患者血清中HGF的含量，不僅可以作為大腸癌的一個(gè)標(biāo)志物，更可以作為預(yù)測大腸癌有無肝轉(zhuǎn)移的一個(gè)指標(biāo)。 結(jié)論：通過本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌患者與對(duì)照組之間相比，HGF值的升高有著顯著的差異性，說明了HGF與大腸癌確實(shí)有著密切的關(guān)系。另外，從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，HGF與大腸癌的分期也有著密切的關(guān)系，而且分期越晚，其血清HGF值就越高，特別是有肝轉(zhuǎn)移的患者

14、，其HGF血清中的表達(dá)也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于無肝轉(zhuǎn)移組，從而進(jìn)一步的提示了血清HGF在大腸癌中可能預(yù)示了一種更具有侵襲性的生物學(xué)行為。然而值得一提的是，在Duck'D的患者中，其中有5例只有其他部位轉(zhuǎn)移，而不存在肝臟轉(zhuǎn)移，雖然其血清HGF值較高，但與Duck'A、B相比較，卻無明顯差異性，分析其原因，可能與例數(shù)較少有關(guān)。總之，血清中HGF值的測定，有可能不僅只成為應(yīng)用于大腸癌患者診斷的一項(xiàng)腫瘤標(biāo)記物，更可能可以作為預(yù)測大腸癌有無肝轉(zhuǎn)移的一個(gè)指標(biāo)，對(duì)