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文檔簡介
1、癲癇是一組以腦功能陣發(fā)性、暫時性紊亂為特征的慢性臨床綜合征,反復(fù)發(fā)作且不可預(yù)測。迄今為止對其發(fā)病詳細(xì)的細(xì)胞與分子機(jī)制的了解仍不甚清楚,任何導(dǎo)致腦部神經(jīng)回路興奮性異常的致病因素均可能誘發(fā)癲癇。(Ast)在神經(jīng)細(xì)胞中占有很大比例,并且具有多種合成與分泌功能。為了探究星型膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機(jī)制,本實驗采用戊四氮癲癇點燃模型,對在癲癇發(fā)病過程中對神經(jīng)系統(tǒng)可塑性改變的影響進(jìn)行了實驗性研究,結(jié)果如下 1.大鼠戊四氮慢性點燃
2、癲癇模型的建立 首先,我們通過大量的前期預(yù)實驗,總結(jié)出了用戊四氮(Pentylenetetrazol,PTZ)進(jìn)行癲癇點燃的最佳劑量和實驗條件。該點燃模型操作方便,對大鼠整體損傷較小,并且回避了腦部外傷導(dǎo)致的Ast反應(yīng)性活化的影響,復(fù)制結(jié)果比較穩(wěn)定,評價點燃效果的指標(biāo)采用Racine行為驚厥評級,發(fā)作程度Ⅳ級或以上的大鼠納入后續(xù)的研究。 2.雌激素及其受體拮抗劑對點燃癲癇大鼠發(fā)作程度及海馬區(qū)星型膠質(zhì)細(xì)胞與突觸改變的影響
3、 成年Wister雄性大鼠32只隨機(jī)分為四組:生理鹽水對照組(NS)、單純致癇組(PTZ)、雌激素干預(yù)組(PTZ+E2)和雌激素受體拮抗劑Tamoxifen(PTZ+TAM)干預(yù)組,除NS組每日腹腔注射生理鹽水(NS)外,其余各組均用PTZ點燃癲癇,觀察各組發(fā)作行為程度變化并進(jìn)行腦電圖(EEG)監(jiān)測,發(fā)作程度Ⅳ級或以上的大鼠納入研究(n=20);然后分別用GFAP與突觸素兩種抗原蛋白的一抗對各組大鼠腦冰凍冠狀面切片進(jìn)行免疫組化染色
4、,對比四組大鼠海馬各區(qū)陽性染色結(jié)果。結(jié)果顯示:PTZ+E2組大鼠癲癇發(fā)作程度普遍較PTZ組高;與NS組比較,致病各組突觸素和染色顯著增強(qiáng)(P<0.01);PTZ+E2組較PTZ組和PTZ+TAM組染色顯著增強(qiáng)(P<0.01)。提示:雌激素能促進(jìn)慢性癲癇的點燃進(jìn)程和發(fā)作程度,并使海馬區(qū)Ast和突觸的增生更顯著,而雌激素受體拮抗劑能部分抑制這種作用;猜測癲癇發(fā)病過程中,能夠合成分泌雌激素并導(dǎo)致突觸形成增加,異常放電回路形成,大腦興奮性放電增
5、加,最終誘發(fā)癲癇發(fā)作。 3.慢性點燃癲癇大鼠海馬區(qū)載脂蛋白E(ApoE)和(GS)水平的改變 3.1本實驗采用免疫組化染色和WesternBlot技術(shù)檢測慢性點燃癲癇大鼠大腦海馬區(qū)apoE陽性細(xì)胞的定位和水平改變。結(jié)果顯示,慢性點燃癲癇大鼠apoE表達(dá)顯著增加。提示其作為腦內(nèi)合成的固醇類物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)載體,apoE可能在慢性癲癇發(fā)病過程中轉(zhuǎn)運(yùn)AST合成分泌的雌激素,從而促進(jìn)突觸發(fā)生,促進(jìn)大腦點燃狀態(tài)的形成和維持有關(guān),也并對第
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