HMBA和桂皮酸對鼻咽癌細(xì)胞CNE2增殖抑制和凋亡的作用及其機(jī)制初探.pdf

1、目的:從細(xì)胞及分子水平初步探討誘導(dǎo)分化劑HMBA和桂皮酸對鼻咽癌細(xì)胞CNE2增殖抑制和凋亡的作用及其可能機(jī)制。
　　方法:應(yīng)用誘導(dǎo)分化劑HMBA處理鼻咽癌細(xì)胞CNE2,倒置相差顯微鏡觀察處理前后鼻咽癌細(xì)胞的生長狀況和細(xì)胞形態(tài);MTT實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞生長及細(xì)胞周期;Hoechst33258染色、吖啶橙染色觀察細(xì)胞凋亡;Annexin V-FITC/ PI法檢測 HMBA對 CNE2細(xì)胞早期凋亡的影響。RT-PCR檢測KLF6

2、基因mRNA的表達(dá)。免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測桂皮酸處理前后CNE2細(xì)胞中KLF6、p53、cyclin D1、c-Jun蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:HMBA處理后貼壁細(xì)胞的數(shù)量隨藥物濃度增加明顯減少;MTT實(shí)驗(yàn)證實(shí)HMBA對鼻咽癌細(xì)胞的生長抑制作用呈濃度-時(shí)間效應(yīng)關(guān)系,隨著誘導(dǎo)劑濃度的增大、作用時(shí)間的延長,其抑制效應(yīng)逐漸增加。處理后鼻咽癌細(xì)胞形狀由原來的橢圓形或多邊形變成不規(guī)則形狀或多角形;細(xì)胞質(zhì)減少,核漿比例變大。根據(jù)IC50,我們

3、選用5mmol/L作為最佳作用濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,培養(yǎng)24h時(shí)對照組細(xì)胞Gl期細(xì)胞比例為59.5％,S期細(xì)胞比例27.5%,而G2期細(xì)胞比例為12.9%,HMBA處理24h后,Gl期細(xì)胞比例為64.9%;S期細(xì)胞為28.3%,G2期細(xì)胞為6.7%,細(xì)胞周期發(fā)生明顯變化(P<0.05);HMBA作用48h后 G1期細(xì)胞增加為67.5%,而S期細(xì)胞為28.5%,G2期細(xì)胞也減少為4.04%,細(xì)胞明顯被阻滯于G1期(P<

4、0.05);處理72h后,細(xì)胞亦顯著被阻滯于G1期(P<0.05),處理96h后,G1期細(xì)胞比例為60.2%,而S期細(xì)胞比例為32.2%,G2期細(xì)胞為7.63%,細(xì)胞周期 Gl期阻滯效應(yīng)更明顯。我們采用三種方法觀察細(xì)胞凋亡,Hoechst33258染色后可見呈高亮藍(lán)色的凋亡細(xì)胞,在部分細(xì)胞內(nèi)可以看到核碎片;吖啶橙染色可以看到凋亡小體的出現(xiàn)。Annexin V-FITC/PI法檢測凋亡顯示,在HMBA處理12h后即出現(xiàn)凋亡細(xì)胞,與對照組相

5、比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示HMBA處理CNE2細(xì)胞后第3天, KLF6 mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)(p<0.05)。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示桂皮酸處理CNE2細(xì)胞后KLF6和p53蛋白表達(dá)上調(diào)(p<0.05),而cyclin D1和c-Jun則表達(dá)下調(diào)(p<0.05)。
　　結(jié)論:誘導(dǎo)分化劑處理后,鼻咽癌細(xì)胞 CNE2生長明顯受到抑制,出現(xiàn)細(xì)胞分化形態(tài),細(xì)胞周期受阻,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。其作用機(jī)理一方面可能是通過上調(diào)