復合營養(yǎng)素對認知與運動功能損傷大鼠的干預作用及其機制研究.pdf

1、目的：建立認知與運動功能損傷大鼠模型；觀察復合營養(yǎng)素配方對認知與運動功能損傷大鼠的改善效果，并初步闡明其作用機制。 方法： (1)海馬內(nèi)注射β淀粉樣蛋白(Aβ)致認知與運動功能損傷大鼠模型的探討。3～4月齡雄性SD大鼠27只，隨機分為正常對照組、Aβ組和生理鹽水組，每組9只。正常對照組不作任何處理，Aβ組每側(cè)海馬內(nèi)注射1μlAβ，生理鹽水組海馬內(nèi)注射等體積生理鹽水。海馬內(nèi)注射兩周后，觀察海馬病理學改變；水迷宮、避暗實驗檢

2、測大鼠的學習、記憶功能；熒光分光光度法測定血清維生素A、E含量；紫外分光光度法測定血清維生素C含量；化學發(fā)光競爭免疫法測定血清葉酸含量；原子吸收分光光度法測定血清鐵、銅、鋅含量；氣相色譜法測定血清游離脂肪酸含量；全血谷胱甘肽還原酶、紅細胞天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性、血清和腦組織乙酰膽堿酯酶(AChE)活性也采用紫外分光光度法。 (2)老齡大鼠作為認知與運動功能損傷動物模型的研究。雄性Wistar大鼠16只，分為老齡組(15月齡)和青年

3、組(3月齡)，每組8只。水迷宮、rod walking及plank walking實驗檢測大鼠的行為學功能。 (3)復合營養(yǎng)素對老齡大鼠認知與運動功能的干預作用及機制研究。選取15月齡Wistar大鼠，雄性14只，雌性16只，隨機分為干預組和對照組，每組雄性7只，雌性8只。干預組大鼠飼喂添加復合營養(yǎng)素的自制飼料，同時灌胃植物提取物混合液，而對照組飼喂基礎飼料，同時灌胃蒸餾水。灌胃劑量為4ml/(kg bw·d)。實驗干預期為10

4、周。采用水迷宮、rod walking實驗檢測大鼠的認知及運動行為；熒光分光光度法檢測腦組織去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、血清VE含量；紫外分光光度法測定腦組織乙酰膽堿(ACh)含量，血清總蛋白含量、白蛋白含量，腦組織及血清AChE活性，全血谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，血清總抗氧化能力(T-AOC)、抑制羥自由基能力；神經(jīng)電生理法觀察海馬齒狀回長時程增強效應的改變；二維凝膠電泳(2-DE)檢測

5、大鼠額葉皮層蛋白質(zhì)表達的變化，利用肽質(zhì)量指紋圖譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索鑒定表達差異的蛋白，Western blotting驗證stathmin 1蛋白的表達變化。 結(jié)果： (1)未觀察到A β組海馬組織A β沉著及明顯的病理變化。與正常對照組比較，A β組學習、記憶功能有下降趨勢，但差異無顯著性；A β組血清VC、鐵含量顯著下降；血清及腦組織AChE活性顯著升高；血清游離脂肪酸構(gòu)成發(fā)生顯著改變。 (2)與青年組大鼠比較

6、，老齡組大鼠認知與運動功能下降。(3)與對照組比較，干預組老齡大鼠發(fā)生以下改變：①認知與運動功能得到改善；抗氧化能力增強，血清VE含量增加；腦組織ACh、NE、5-HT、DA含量升高，而血清及腦組織．AChE活性顯著下降；②海馬齒狀回長時程增強幅度明顯提高，海馬突觸傳遞效能增強；③額葉皮層2-DE圖譜中11個蛋白點含量發(fā)生變化。質(zhì)譜鑒定的10種蛋白質(zhì)中，其中6種蛋白質(zhì)含量降低，分別為：丙酮酸激酶、丙酮酸脫氫酶E1 α1、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶

7、、線粒體肌酸激酶1、電壓依賴性陰離子通道2、磷酸丙糖異構(gòu)酶1；4種蛋白質(zhì)含量升高，分別為：過氧化物氧化還原酶2、線粒體H-ATP合酶d亞單位、stathmin1、Cu-Zn超氧化物歧化酶。④額葉皮層stathmin 1蛋白的表達量升高。 結(jié)論： (1)老齡大鼠可作為認知與運動功能損傷的動物模型研究復合營養(yǎng)素的干預效果及其機制。 (2)復合營養(yǎng)素對老齡大鼠的認知與運動功能有改善作用，其作用途徑可能與改善大鼠的抗氧化