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文檔簡介
1、目的:建立認知與運動功能損傷大鼠模型;觀察復合營養(yǎng)素配方對認知與運動功能損傷大鼠的改善效果,并初步闡明其作用機制。 方法: (1)海馬內(nèi)注射β淀粉樣蛋白(Aβ)致認知與運動功能損傷大鼠模型的探討。3~4月齡雄性SD大鼠27只,隨機分為正常對照組、Aβ組和生理鹽水組,每組9只。正常對照組不作任何處理,Aβ組每側(cè)海馬內(nèi)注射1μlAβ,生理鹽水組海馬內(nèi)注射等體積生理鹽水。海馬內(nèi)注射兩周后,觀察海馬病理學改變;水迷宮、避暗實驗檢
2、測大鼠的學習、記憶功能;熒光分光光度法測定血清維生素A、E含量;紫外分光光度法測定血清維生素C含量;化學發(fā)光競爭免疫法測定血清葉酸含量;原子吸收分光光度法測定血清鐵、銅、鋅含量;氣相色譜法測定血清游離脂肪酸含量;全血谷胱甘肽還原酶、紅細胞天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性、血清和腦組織乙酰膽堿酯酶(AChE)活性也采用紫外分光光度法。 (2)老齡大鼠作為認知與運動功能損傷動物模型的研究。雄性Wistar大鼠16只,分為老齡組(15月齡)和青年
3、組(3月齡),每組8只。水迷宮、rod walking及plank walking實驗檢測大鼠的行為學功能。 (3)復合營養(yǎng)素對老齡大鼠認知與運動功能的干預作用及機制研究。選取15月齡Wistar大鼠,雄性14只,雌性16只,隨機分為干預組和對照組,每組雄性7只,雌性8只。干預組大鼠飼喂添加復合營養(yǎng)素的自制飼料,同時灌胃植物提取物混合液,而對照組飼喂基礎飼料,同時灌胃蒸餾水。灌胃劑量為4ml/(kg bw·d)。實驗干預期為10
4、周。采用水迷宮、rod walking實驗檢測大鼠的認知及運動行為;熒光分光光度法檢測腦組織去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、血清VE含量;紫外分光光度法測定腦組織乙酰膽堿(ACh)含量,血清總蛋白含量、白蛋白含量,腦組織及血清AChE活性,全血谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性,血清總抗氧化能力(T-AOC)、抑制羥自由基能力;神經(jīng)電生理法觀察海馬齒狀回長時程增強效應的改變;二維凝膠電泳(2-DE)檢測
5、大鼠額葉皮層蛋白質(zhì)表達的變化,利用肽質(zhì)量指紋圖譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索鑒定表達差異的蛋白,Western blotting驗證stathmin 1蛋白的表達變化。 結(jié)果: (1)未觀察到A β組海馬組織A β沉著及明顯的病理變化。與正常對照組比較,A β組學習、記憶功能有下降趨勢,但差異無顯著性;A β組血清VC、鐵含量顯著下降;血清及腦組織AChE活性顯著升高;血清游離脂肪酸構(gòu)成發(fā)生顯著改變。 (2)與青年組大鼠比較
6、,老齡組大鼠認知與運動功能下降。(3)與對照組比較,干預組老齡大鼠發(fā)生以下改變:①認知與運動功能得到改善;抗氧化能力增強,血清VE含量增加;腦組織ACh、NE、5-HT、DA含量升高,而血清及腦組織.AChE活性顯著下降;②海馬齒狀回長時程增強幅度明顯提高,海馬突觸傳遞效能增強;③額葉皮層2-DE圖譜中11個蛋白點含量發(fā)生變化。質(zhì)譜鑒定的10種蛋白質(zhì)中,其中6種蛋白質(zhì)含量降低,分別為:丙酮酸激酶、丙酮酸脫氫酶E1 α1、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶
7、、線粒體肌酸激酶1、電壓依賴性陰離子通道2、磷酸丙糖異構(gòu)酶1;4種蛋白質(zhì)含量升高,分別為:過氧化物氧化還原酶2、線粒體H-ATP合酶d亞單位、stathmin1、Cu-Zn超氧化物歧化酶。④額葉皮層stathmin 1蛋白的表達量升高。 結(jié)論: (1)老齡大鼠可作為認知與運動功能損傷的動物模型研究復合營養(yǎng)素的干預效果及其機制。 (2)復合營養(yǎng)素對老齡大鼠的認知與運動功能有改善作用,其作用途徑可能與改善大鼠的抗氧化
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