G250mAb修飾PEI介導(dǎo)Ki67 siRNA對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa的靶向性研究.pdf

1、目的:研究G250mAb 修飾的PEI 基因載體（G250mAb-PEI）對(duì)高表達(dá)G250 抗原的宮頸癌細(xì)胞HeLa 的靶向性，并利用G250mAb-PEI 介導(dǎo)Ki67 siRNA 轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞HeLa，觀察其抗腫瘤效應(yīng)和靶向性。
　　 方法:
　　 1. 以PEI 為骨架，將G250mAb 和PEI 偶聯(lián)構(gòu)建成G250mAb-PEI 靶向基因載體。
　　 2. 體外轉(zhuǎn)染篩選出最佳合成比例及檢測(cè)其細(xì)胞毒性。<

2、br>　　 3. 以G250mAb-PEI和PEI為轉(zhuǎn)染載體，將EGFP報(bào)告基因分別轉(zhuǎn)入HeLa、HepgG2 和NIH3T3細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。
　　 4. G250mAb-PEI 和PEI 分別介導(dǎo)Ki67 siRNA 轉(zhuǎn)染HeLa、HepG2、NIH3T3細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR、Western Blot 檢測(cè)Ki67 mRNA 和蛋白的表達(dá)；MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；Annexin V-PI 法、DAPI

3、法檢測(cè)細(xì)胞早、晚期凋亡情況。
　　 結(jié)果:
　　 1. 成功構(gòu)建了G250mAb-PEI 靶向基因載體。
　　 2. 體外轉(zhuǎn)染篩選出最佳合成比例為G250mAb-PEI（1：400）；其細(xì)胞毒性低于PEI，生物相容性提高。
　　 3. G250mAb-PEI（1：400）對(duì)HeLa 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率明顯高于PEI，對(duì)HepG2及NIH3T3 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率則沒(méi)有差異。
　　 4. MTT 法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)

4、，G250mAb-PEI/pSilencer-Ki67 組和PEI/pSilencer-Ki67 組轉(zhuǎn)染后的HeLa 細(xì)胞增殖明顯被抑制，但對(duì)正常細(xì)胞NIH3T3 無(wú)影響。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)G250mAb-PEI/pSilencer-Ki67 組抑制HeLa 細(xì)胞增殖的效果比PEI/pSilencer-Ki67 組提高。
　　 5. RT-PCR 與WesternBlot 檢測(cè)結(jié)果顯示，G250mAb-PEI/pSilencer-K

5、i67 組和PEI/pSilencer-Ki67 組，Ki67 mRNA 和蛋白表達(dá)比其他組明顯降低(P<0.05)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)G250mAb-PEI/pSilencer-Ki67 組Ki67 mRNA 和蛋白表達(dá)比PEI/pSilencer-Ki67 組顯著降低(P<0.05)。
　　 6. Annexin V/PI 和DAPI 染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示，G250mAb-PEI/pSilencer-Ki67 組，HeLa