丹酚酸B通過MEK-ERK信號(hào)通路抑制氧化應(yīng)激介導(dǎo)的BMSCs凋亡的研究.pdf

1、目的：觀察Sal B對(duì)氧化應(yīng)激介導(dǎo)BMSCs凋亡的影響并探討其可能機(jī)制。 方法：利用500μM H2O2刺激細(xì)胞24h模擬體內(nèi)損傷局部微環(huán)境中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。利用MTT的方法測(cè)定Sal B處理對(duì)BMSCs活性影響，初步篩定Sal B的有效作用濃度和作用方式；然后細(xì)胞分為5組：空白對(duì)照組，氧化應(yīng)激(H2O2)組，1μM Sal B+H2O2組，10μM Sal B+H2O2組，100μM Sal B+H2O2組，應(yīng)用MTT、

2、流式細(xì)胞儀及Hoechst標(biāo)記的方法檢測(cè)Sal B及MEK抑制劑PD98059對(duì)氧化應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞活性下降以及細(xì)胞凋亡增加效應(yīng)的影響；通過DCF熒光染色的方法檢測(cè)氧化應(yīng)激及丹酚酸B對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧生成的影響；用western blot的方法檢測(cè)p—ERK1/2表達(dá)情況：同時(shí)用RT—PCR和細(xì)胞免疫熒光的方法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Caspase—3和Bc1-2在mRNA水平和Caspase—3在蛋白水平的表達(dá)。 結(jié)果：①Sal B的處理濃

3、度。1，10，100，200μM Sal B處理BMSCs24h,細(xì)胞活性分別為102.5±7.8％，110.3±8.4％，98.5±5.6％和93.3±6.4％。結(jié)果表明：1，10，100μM Sal B處理24h對(duì)BMSCs活性無明顯影響，200μM Sal B降低BMSCs活性。因此我們選擇確定1，10，100μM Sal B為處理濃度(表1-1)。②Sal B的處理方式。10μM Sal B預(yù)處理24h然后500μM H2O2刺

4、激24h；10μM Sal B和500μMH2O2共處理24h，細(xì)胞活性分別為67.1±4.21％和86.5±3.37％。結(jié)果表明：Sal B共處理組，細(xì)胞活性明顯高于陽(yáng)性對(duì)照組(66.5±4.5％，P<0.05)和預(yù)處理組(表1-2)，因此我們選擇同時(shí)給藥為處理方式。③Sal B對(duì)H2O2引起的BMSCs活性下降的影響。500μM H2O2刺激24h BMSCs活性下降為53.60±4.21％，而Sal B共處理能提高細(xì)胞活性，其中1

5、0μM、100μM效果明顯，細(xì)胞活性分別上升至85.33±9.08％和75.78±6.28％(圖1-3)。下降，分別為10.8±1.8％及8.9±2.4％，P<0.05(圖1-9)。 結(jié)論：Sal B能夠增強(qiáng)BMSCs抗氧化應(yīng)激能力，減少H2O2刺激引起的細(xì)胞凋亡，其保護(hù)機(jī)制可能與Sal B直接降低氧化應(yīng)激情況下細(xì)胞內(nèi)活性氧的生成水平，抑制前凋亡基因p—ERK1/2的激活，下調(diào)凋亡相關(guān)基因Caspase—3而上調(diào)Bc1-2的表達(dá)