PolyI：C持續(xù)刺激對小鼠BMDC成熟的影響和CpG持續(xù)刺激對小鼠BMDC作用的基因芯片分析.pdf

1、目的：研究PolyI：C和CpG持續(xù)刺激對小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞(DC)成熟的影響。方法：BMDC分為PolyI：C或CpG持續(xù)刺激組、短期刺激組和對照組；流式檢測表型和攝取抗原的能力，ELISA檢測細(xì)胞因子水平，混淋實驗檢測提呈抗原的能力?；蛐酒椒ǚ治龌虮磉_(dá)譜變化。結(jié)果：PolyI：C早期持續(xù)刺激可抑制BMDC的成熟，表現(xiàn)為：形態(tài)上BMDC集落小、毛刺少；表達(dá)Iab、CD80、CD86和CD40水平低；分泌IL-6、IL-12p40

2、、IL-1β、TNF-α、IFNγ和MMP9水平較低，而IL-10、TGFβ較高；攝取抗原的功能維持在高水平，而刺激同種異基因T細(xì)胞增殖能力不足。基因芯片結(jié)果顯示：CpG持續(xù)刺激組BMDC中許多DC常見活化信號基因均比CpG短期刺激組BMDC表達(dá)下調(diào)2倍以上；進(jìn)一步說明CpG持續(xù)刺激可抑制BMDC的成熟。初步體內(nèi)實驗結(jié)果提示：CpG持續(xù)作用的BMDC對小鼠特異性抗體產(chǎn)生有一定的抑制作用。結(jié)論：PolyI：C或CpG持續(xù)刺激可抑制DC的發(fā)

3、育成熟，可能是持續(xù)嚴(yán)重感染時免疫功能低下的原因。 持續(xù)感染是一種嚴(yán)重的臨床病癥，具有病死率高，治療困難等特點。而在持續(xù)感染中，各種感染因子起著十分重要的作用；值得注意的是這類感染病人又常常伴有特異性免疫功能低下的特征，而特異性免疫功能低下也正是感染難以控制的原因之一，但其具體機(jī)制尚不清楚。 樹突狀細(xì)胞(dendriticcell，DC)是目前已知的功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞，具有刺激初始T細(xì)胞活化增殖、啟動免疫應(yīng)答的獨特

4、功能。而目前體外研究最為成熟的體系就是小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(bonemarrowderivedDC，BMDC)。 基于DC的重要功能及其在機(jī)體特異性免疫中的關(guān)鍵地位，本課題組以DC為突破口，利用各種感染因子(LPS或CpG等)對DC的作用來揭示、模擬和研究持續(xù)感染時特異性免疫功能低下的機(jī)制。在本課題組以往的研究中，小鼠骨髓來源的DC(BMDC)在培養(yǎng)時按刺激物不同被分為如下3組：①LPS或CpG持續(xù)刺激組(模擬嚴(yán)重持續(xù)感染時感

5、染因子對DC的影響)，②短期刺激組(誘導(dǎo)DC成熟)和③無刺激組。結(jié)果顯示：持續(xù)LPS或CpG刺激可抑制DC成熟：感染因子持續(xù)刺激組BMDC表達(dá)MHCⅡ、CD83、CD80/86和CD40均顯著降低，產(chǎn)生IL-12和TNF-α水平也較低，攝取抗原的能力較強(qiáng)而提呈抗原的能力較弱。以上結(jié)果也提示嚴(yán)重持續(xù)感染時的特異性免疫功能下降可能與DC被誘導(dǎo)于不成熟狀態(tài)，不能有效提呈抗原有關(guān)。 鑒于以上研究基礎(chǔ)，本研究主要分3個部分，第一個部分是探

6、討DC的TLR信號通路持續(xù)活化后抑制效應(yīng)的普遍性問題：即LPS、CpG以外的TLR配體(如PolyI：CTLR3-Ligand)早期持續(xù)刺激體外培養(yǎng)中的BMDC，對BMDC的分化、發(fā)育和增殖是否也有抑制作用的問題；實驗結(jié)果顯示，在用GM-CSF誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞向DC分化的早期持續(xù)予以PolyI：C刺激，可以在形態(tài)、表型和功能上抑制BMDC的成熟。第二個部分是用基因芯片的方法研究持續(xù)刺激組BMDC的不成熟機(jī)制。實驗采用的是高通量的Affyme