應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制MCF7-MX100細胞中BCRP表達和活性.pdf

1、浙江大學碩士學位論文應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制MCF7MX100細胞中BCRP表達和活性姓名：余彩虹申請學位級別：碩士專業(yè)：藥學指導(dǎo)教師：曾蘇蔣惠娣20130306浙江大學碩士學位論文中文摘要2、化學合成siIⅢA及其對BcRP的干擾作用考察了針對BcRPmRNA不同位點獲得的三條化學合成siI礬A(siBcI沖1，si—BCRP2，si—BcRP3)對MCF7／Mxl00細胞中BcRP蛋白的干擾作用。RTPCR和wrestemblot檢測

2、結(jié)果顯示：si—BCRP2和si—BcRP3組干擾效果明顯，mRNA抑制率分別為97％和95％，蛋白的表達抑制率分別為76％和71％。流式細胞術(shù)實驗結(jié)果顯示：si—BcRP2和siBcRP3組對米托葸醌的敏感性明顯提高，與對照組差異有顯著性(PO01)。3、干擾BCRP／ABCG2基因的慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的建立從前面兩部分研究篩選出干擾效果好的干擾序列，擴增siRNA模板，酶切連接到pTⅪPz質(zhì)粒中，然后采用轉(zhuǎn)染試劑Rochextre

3、meGENE在狀態(tài)良好的lenti293t細胞中進行慢病毒包裝。包裝48h后收集病毒液，McF7／Mxloo耐藥細胞用8“g／mLpolybrene感染病毒。然后經(jīng)過嘌呤霉素(1ug／mL)篩選和強力霉素(1肛∥mL)誘導(dǎo)，構(gòu)建干擾BcIo／ABcG2基因的慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株：LentiBcRP2和LentiBcRP3。RTPcR，westemblot和流式細胞術(shù)法檢測各組慢病毒干擾穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株中BcI沖的基因表達以及活性情況。結(jié)果

4、顯示，LentiBcRP2和Lenti—BCRP3組的mI斟A抑制率分別為72％和56％，蛋白表達的抑制率分別為70％和53％，Lenti—BcI沖2的藥物敏感性也顯著增加(Po05)。4、干擾BcI沖／ABCG2基因的慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的應(yīng)用本章考察了二氫楊梅素(30mol／L)，異鼠李素(25岬ol／L)，淫羊藿苷(10pmol／L)在慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株中的單獨積聚以及與米托葸醌(5“mol／L)的相互作用。單獨積聚總孵育時間為