Endothelin-3與Calretinin在巨結(jié)腸腸壁中的表達(dá)及相關(guān)性的研究.pdf

1、先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung's disease,HD)又稱先天性腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺乏癥,是一種以腸道末端神經(jīng)節(jié)細(xì)胞完全缺如為特征的消化道常見(jiàn)畸形.其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,目前認(rèn)為,HD發(fā)病是多個(gè)基因或易感位點(diǎn)共同作用或相互交叉影響的結(jié)果,其中RET/GDNF和EDN-3/EDNRB/ECE-1這兩個(gè)信號(hào)通路的研究最為廣泛,受體酪氨酸激酶基因(receptor tyrosine kinase,RET)信號(hào)通路障礙主要引起家族

2、性巨結(jié)腸, 內(nèi)皮素3(endothelin-3,EDN-3)或內(nèi)皮素B受體(endothelin-B receptor,EDNRB)基因的變異主要出現(xiàn)在散發(fā)性HD患兒中.近年來(lái),國(guó)內(nèi)外對(duì):EDN-3基因的突變研究較多,但對(duì)其在HD患者結(jié)腸中表達(dá)情況如何研究較少.鈣視網(wǎng)膜蛋白(calretinin,CR)是一種重要的鈣結(jié)合蛋白, CR參與神經(jīng)細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子(Ca<'2+>)的調(diào)節(jié),而Ca<'2+>是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使,對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的代謝和

3、功能產(chǎn)生廣泛的影響.EDN-3/EDNRB信號(hào)傳導(dǎo)通道及神經(jīng)型一氧化氮合酶基因(nNOS)、C-fos基因均是通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>濃度參與HD的發(fā)病.本研究收集散發(fā)性HD患兒結(jié)腸標(biāo)本,檢測(cè)其腸壁中CR基因和EDN-3基因mRNA的表達(dá)情況,探討CR基因是否參與散發(fā)性HD的發(fā)生及其與EDN-3基因的關(guān)系. 材料和方法(1)收集18例散發(fā)性HD患兒手術(shù)切除結(jié)腸標(biāo)本痙攣段和擴(kuò)張段,RT-PCR技術(shù)觀察各段結(jié)腸腸壁中EDN-3基因和CR

4、基因表達(dá)情況,比較痙攣段和擴(kuò)張段EDN-3基因及CR基因 mRNA平均相對(duì)量的變化. (2)收集18例非HD患兒結(jié)腸標(biāo)本作為對(duì)照組,檢測(cè)其結(jié)腸壁中:EDN-3基因和CR基因 mRNA情況,比較非HD和HD患兒中EDN.3和CR基因mRNA平均相對(duì)量的變化. (3)免疫組化法檢測(cè)散發(fā)性HD患兒痙攣段和擴(kuò)張段中CR蛋白表達(dá)情況,比較兩組中CR蛋白表達(dá)的變化. 結(jié)果 (1)與對(duì)照組相比,在散發(fā)性HD患兒結(jié)腸壁中

5、,無(wú)論是有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的擴(kuò)張段還是無(wú)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的痙攣段, EDN-3基因mRNA相對(duì)量都明顯減少(p<0.01).在HD痙攣段和擴(kuò)張段EDN-3基因mRNA.相對(duì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05). (2)與對(duì)照組相比,HD擴(kuò)張段、HD痙攣段CR基因mRNA相對(duì)量逐漸減少,任意兩組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01). (3)散發(fā)性HD患兒痙攣段和擴(kuò)張段CR蛋白表達(dá)情況不一,痙攣段CR蛋白近乎缺失.而在擴(kuò)張段呈強(qiáng)陽(yáng)性表

6、達(dá),與痙攣段相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01). (4)與對(duì)照組相比,HD擴(kuò)張段、HD痙攣段EDN-3基因和CR基因mRNA相對(duì)量均逐漸減少,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)二元變量線性相關(guān)性分析,結(jié)果二者呈正相關(guān)(Y=0.999,p=0.023<0.05). 結(jié)論 (1)EDN-3基因是散發(fā)性HD的重要易感基因,其mRNA表達(dá)水平的改變比其突變更頻繁;EDN-3基因mRNA表達(dá)水平下調(diào)參與了散發(fā)性HD的發(fā)生. (2)與正常