探討神經(jīng)標志物在先天性巨結(jié)腸癥腸壁的表達及意義.pdf

1、目的： 本研究應用免疫組織化學(免疫組化)方法，觀察先天性巨結(jié)腸癥(Hirschsprung's disease，HD)患者擴張段(有神經(jīng)節(jié)細胞段，NG)和痙攣段(無神經(jīng)節(jié)細胞段，AG)以及非先天性巨結(jié)腸癥病人(對照組)腸壁神經(jīng)組織中BCL-2(B-lymphoma/leukemia-2)蛋白、神經(jīng)細胞粘附分子(neural cell adhesion molecule，NCAM)、神經(jīng)細胞特異性烯醇化酶(Neuron spec

2、ific enolase，NSE)、S-100蛋白(Soluble protein 100，S-100)的表達結(jié)果，并采用圖像分析技術(shù)對腸道神經(jīng)系統(tǒng)進行定量分析：與蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosine，HE)染色結(jié)果比較，加以分析，以幫助診斷和了解HD的病理生理改變。 方法： 1、收集蘇州大學附屬兒童醫(yī)院小兒外科2005-2007年先天性巨結(jié)腸病人腸管標本31例，包括HD擴張段與痙攣段。以10例年齡與之相符

3、的無HD患兒的手術(shù)切除結(jié)腸標本作為對照組。所有標本均經(jīng)10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋保存。 2、分別對HD擴張段、痙攣段、對照組腸壁組織進行免疫組織化學染色和HE染色，計算機成像系統(tǒng)照相存盤，用圖像分析軟件(Image-Pro-Plus)判定NCAM、S-100在HD擴張段與痙攣段單位環(huán)肌層中的陽性染色面積百分比。 結(jié)果： 1、先天性巨結(jié)腸擴張段HE和免疫組化染色，顯微鏡觀察見：神經(jīng)節(jié)細胞皆存在，肌層神經(jīng)纖維有

4、不同程度的排列改變，神經(jīng)節(jié)細胞大小不等；痙攣段均未見神經(jīng)節(jié)細胞。 2、BCL-2在神經(jīng)節(jié)細胞胞漿中呈強陽性表達，神經(jīng)纖維不表達或弱陽性，而且在未成熟神經(jīng)節(jié)細胞中也表達；NSE和NCAM在腸壁肌間、粘膜下神經(jīng)叢中神經(jīng)節(jié)細胞細胞及神經(jīng)纖維中均有表達；S-100不表達于神經(jīng)節(jié)細胞。 3、定量分析：HD痙攣腸段缺乏神經(jīng)節(jié)細胞；NCAM、S-100在HD痙攣段與擴張段環(huán)肌層表達的陽性面積率比較有明顯差別(P<0.05)，NCAM和

5、S-100在痙攣段的表達明顯減少。 結(jié)論： 1、BCL-2免疫組化染色可很好的顯示神經(jīng)節(jié)細胞，尤其是未成熟神經(jīng)節(jié)細胞，較經(jīng)典的NSE、S-100免疫組化染色好，對鑒別HD與先天性巨結(jié)腸癥同源病(HAD)有重要意義。 2、NCAM對神經(jīng)節(jié)細胞及神經(jīng)纖維均染色，只表達于神經(jīng)節(jié)細胞胞膜上，可與BCL-2的神經(jīng)節(jié)細胞胞漿染色模式互補，更利于診斷HD。 3、BCL-2在HD病變腸段表達減少，可能參與HD的發(fā)病機制。