miRNA-200c在乳腺癌中的表達(dá)及其調(diào)控基因網(wǎng)絡(luò)的篩選.pdf

1、目的：分析miR-200c在乳腺細(xì)胞株及乳腺病變組織中的表達(dá);篩選miR-200c調(diào)控的基因網(wǎng)絡(luò)與信號通路。
　　方法：實(shí)時熒光定量RT-PCR方法檢測12個乳腺細(xì)胞株中miR-200c的表達(dá);原位雜交方法分析miR-200c在不同乳腺疾病中的表達(dá);mRNA表達(dá)譜生物芯片與生物信息學(xué)軟件對miR-200cmimic轉(zhuǎn)染的4個乳腺癌細(xì)胞株mRNA表達(dá)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，篩選差異表達(dá)基因及其相關(guān)信號通路;免疫組化驗(yàn)證miR-200c預(yù)測

2、靶點(diǎn)EDNRA在乳腺疾病組織芯片中的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴實(shí)時熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示，4個高度惡性乳腺癌細(xì)胞株(BT549、HS578T、MDA-MB-231、SUM159PT)中miR-200c的表達(dá)較6個低度惡性細(xì)胞株(BT474、MCF7、MDA-MB-468、SKBR3、T-47D、ZR-75-1)和永生化正常乳腺上皮細(xì)胞株(MCF10A、MCF12A)中為低(p＜0.01)。⑵乳腺疾病組織芯片原位雜交結(jié)果顯示，36例

3、正常與良性乳腺病變中，27例表達(dá)陽性;36例乳腺癌中，18例表達(dá)陽性。miR-200c的表達(dá)在正常、良性乳腺病變組織中的表達(dá)明顯高于乳腺癌(p=0.028)。⑶mRNA表達(dá)譜芯片分析結(jié)果顯示，與mimic control轉(zhuǎn)染組比較，miR-200cmimic轉(zhuǎn)染的BT549、HS578T、MDA-MB-231和SUM159PT細(xì)胞株中分別有1160、1731、1579和1630個基因表達(dá)下調(diào)（倍數(shù)值＜-1.25）。任意3個轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中的

4、共下調(diào)基因與5個miRNA調(diào)控靶點(diǎn)分析系統(tǒng)（TargetScan6.2、miRDB、PicTar、microrna.org和DIANA LAB）預(yù)測的miR-200c調(diào)控基因綜合比較，獲得45個交集基因。⑷生物信息學(xué)分析顯示45個差異表達(dá)基因相關(guān)信號通路包括G13信號通路、突觸傳遞（synaptic transmission）信號通路、神經(jīng)沖動傳遞(transmission ofnerve impulse)信號通路、轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控(nega

5、tive regulation of transcription)信號通路和細(xì)胞內(nèi)代謝負(fù)調(diào)控(negative regulation of cellular metabolism)信號通路等;不同的信號通路可以通過共調(diào)基因相互聯(lián)系;在特定的信號通路中，共調(diào)基因間也存在密切的相互聯(lián)系。⑸miR-200c預(yù)測靶蛋白EDNRA免疫組化分析顯示，36例乳腺癌標(biāo)本中17例表達(dá)陽性(47.22％)，明顯高于癌旁正常組織與良性乳腺病變中EDNRA的陽

6、性表達(dá)(16.67％)，其表達(dá)量與乳腺病變惡性度相關(guān)(p=0.005)。部分組織切片的EDNRA免疫組化與原位雜交結(jié)果相互比較，發(fā)現(xiàn)EDNRA的表達(dá)與miR-200c的表達(dá)相反，提示EDNRA可能是miR-200c的調(diào)控靶點(diǎn)。
　　結(jié)論：①相較于正常、低度惡性細(xì)胞株，miR-200c的表達(dá)在高度惡性乳腺癌細(xì)胞株中明顯下調(diào)。②miRNA原位雜交方法在組織標(biāo)本上的應(yīng)用，能定性并半定量反映miRNA的表達(dá)情況。乳腺疾病組織芯片的miR-