p75NTR陽性人食管鱗癌細胞的干細胞特性研究.pdf

1、食管腫瘤干細胞是食管癌組織中一小部分具有自我更新、無限增殖和多向分化潛能的細胞，它在食管癌組織中所占比例雖然很少，卻與食管癌發(fā)生、發(fā)展與轉移密切相關。p75NTR是一種低親和性神經(jīng)營養(yǎng)素受體(neurotrophin receptor p75，p75NTR)，屬Ⅰ型跨膜TNF受體超家族成員。在以往的研究中，p75NTR曾被用來分離神經(jīng)冠干細胞，鼠脂肪多能干細胞和人角膜上皮原始祖細胞等。Okumura等研究證明正常食道上皮細胞中的p75N

2、TR+細胞具有增殖、自我更新及多向分化能力，經(jīng)鑒定為食道上皮干細胞。
　　本實驗將采用流式細胞分選技術對食管鱗癌細胞以p75NTR為標志進行分選，而后將p75NTR+和p75NTR—食管鱗癌細胞進行生物學特性研究和基因表達譜差異篩選，并以篩選出的某一差異基因為目的基因，通過干擾其表達后研究p75NTR+食管鱗癌細胞增殖及侵襲情況。
　　本文從以下幾部分展開論述：
　　第一部分 p75NTR陽性食管鱗癌細胞生物學特性研究

3、
　　目的：分選獲取p75NTR+食管鱗癌細胞，通過一系列實驗探討其是否具有TSC的特性。
　　方法：以流式細胞儀分選獲取相應p75NTR+和p75NTR—食管鱗癌細胞，而后分別進行細胞單克隆形成能力、增殖分化能力、侵襲能力、耐藥能力、成瘤能力的對比研究試驗，來探討p75NTR+人食管鱗癌細胞的TSC的特性。
　　結果：成功分選出p75NTR+和p75NTR—食管鱗癌細胞； p75NTR+細胞的單克隆形成能力、自我更新

4、能力、侵襲能力強于p75NTR—細胞；在對化療藥物的耐受能力及小鼠致瘤能力上，p75NTR+細胞明顯強于p75NTR—細胞。
　　結論：p75NTR+食管鱗癌細胞比p75NTR—細胞具有更強的侵襲性、致瘤能力及耐化療能力，可能富集食管磷癌干細胞。
　　第二部分p75NTR陽性和p75NTR陰性食管鱗癌細胞差異表達功能基因篩選
　　目的：對比 p75NTR+和 p75 NTR—食管鱗癌細胞基因表達譜差異，探尋并篩選p75

5、NTR+食道鱗癌細胞中干細胞特性相關基因的表達，為從腫瘤干細胞角度研究食管腫瘤的發(fā)病機理和尋找新的治療靶點提供線索。
　　方法：采用全基因組表達譜芯片對p75NTR+和p75NTR—細胞進行基因表達譜差異分析及篩選，并對篩選出的顯著差異表達基因，應用RT-PCR方法比較部分基因豐度。
　　結果：在食管鱗癌細胞中p75NTR+細胞較p75NTR—細胞，Bmi-1和EZH2顯著高表達（P＜0.01）；根據(jù)生物學功能分類結果，初步

6、篩選出和干細胞特性密切相關的與TGF-β和Wnt信號途徑相關的上調基因共12條。
　　結論：p75NTR+與p75 NTR—細胞比較，p75NTR+食管鱗癌細胞高表達與干細胞特性相關基因（Bmi-1、EZH2），進一步證實了p75NTR+食管鱗癌細胞具有腫瘤干細胞特性。并為尋找食管鱗癌干細胞靶向治療提供線索。
　　第三部分 RNA干擾沉默EZH2基因對P75NTR陽性食管鱗癌細胞增殖及侵襲的影響
　　目的：以第二部分篩

7、選的差異基因EZH2為目的基因，通過干擾沉默目的基因后，對p75NTR+食管鱗癌細胞增殖及侵襲有何影響。
　　方法：以EZH2基因為靶點，設計構建其干擾小RNA的表達載體并轉染p75NTR+食管鱗癌細胞，之后通過一系列實驗，評價 RNA干擾沉默 EZH2基因后對p75NTR+食管鱗癌細胞增殖及侵襲的影響
　　結果：p75NTR+食管鱗癌細胞中成功轉染了干擾EZH2基因表達小RNA載體，細胞轉染后，實驗組細胞倍增時間較對照組明