阻斷內(nèi)源性p75NTR對(duì)PTSD大鼠的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(PTSD)是指個(gè)體經(jīng)歷突發(fā)性、威脅性或?yàn)?zāi)難性生活事件后，使個(gè)體延遲出現(xiàn)和長期持續(xù)存在的精神障礙。目前，臨床上PTSD的癥狀主要有重現(xiàn)創(chuàng)傷性體驗(yàn)、情感麻痹冷漠、警覺性增高且易激惹、失眠、情緒起伏大等。PTSD不僅導(dǎo)致個(gè)體生活質(zhì)量下降、社會(huì)職業(yè)功能受損，而且還經(jīng)常和物質(zhì)濫用、抑郁障礙、焦慮障礙、恐懼癥等共病，給家庭及社會(huì)造成長期而持續(xù)的負(fù)面影響。因此，深入探討PTSD的發(fā)生機(jī)制、尋求有效的治療靶點(diǎn)，對(duì)于發(fā)展持久有效的預(yù)防和治

2、療措施具有重要的指導(dǎo)意義。p75神經(jīng)營養(yǎng)素受體(p75NTR)作為一種低親和力、多效能的神經(jīng)營養(yǎng)素受體，在調(diào)控細(xì)胞凋亡、軸突生長、細(xì)胞周期等方面具有重要作用。p75NTR的激活除可促進(jìn)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)與酪氨酸激酶B(TrkB)高親和性受體結(jié)合介導(dǎo)神經(jīng)元的再生，還可作為Nogo-66受體（NgR）的協(xié)同受體參與神經(jīng)元突起生長的抑制作用。臨床資料顯示，p75NTR可通過Caspase-9和pro-BDNF介導(dǎo)神經(jīng)元的凋亡，導(dǎo)致

3、PTSD患者海馬和杏仁核體積減?。涣硪环矫?，PTSD患者的創(chuàng)傷性記憶持久存在并易于激活，這種恐懼性記憶可通過p75NTR和pro-BDNF介導(dǎo)突觸可塑性的雙向調(diào)節(jié)來實(shí)現(xiàn)。因此，p75NTR作為一個(gè)新的治療靶點(diǎn)，可能參與PTSD的病理生理過程。本研究通過側(cè)腦室注射(ICV)前期我們通過基因工程方法制備的p75NTR胞外域（ED）與IgG Fc融合蛋白（p75NTR-ED-Fc）來拮抗內(nèi)源性p75NTR的活性，并通過行為學(xué)鑒定和組織學(xué)檢測(cè)評(píng)

4、價(jià)治療效果，同時(shí)探討p75NTR在海馬神經(jīng)元凋亡及突觸改變中的作用及分子機(jī)制，為篩選治療PTSD患者的藥物提供可靠的新型靶點(diǎn)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴將8周齡的雌性SD大鼠隨機(jī)分為Control組、PTSD+p75NTR-ED-Fc組、PTSD+NS組及PTSD組，采用單一連續(xù)刺激(Single-prolonged stress，SPS)法制備PTSD動(dòng)物模型，對(duì)PTSD+p75NTR-ED-Fc組進(jìn)行給藥干預(yù)，對(duì)PTSD+N

5、S組給予等量的生理鹽水。⑵采用曠場實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定，通過行為學(xué)數(shù)據(jù)比較各組之間的差異，初步評(píng)價(jià)治療效果。⑶采用HE染色、NISSL染色及Golgi-cox染色的方法觀察各組海馬神經(jīng)元及樹突棘的基本結(jié)構(gòu)與形態(tài)。⑷采用免疫熒光染色的方法檢測(cè)與神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白如 p75NTR、Bcl-2及Caspase-3的表達(dá)，檢測(cè)與神經(jīng)突觸可塑性相關(guān)因子如SynapsinI、pCREB及ROCK-2的

6、表達(dá)。評(píng)價(jià)治療效果的同時(shí)，探討PTSD發(fā)生機(jī)制。
　　本研究表明：①行為學(xué)結(jié)果：拒俘反應(yīng)：PTSD組大鼠拒俘反應(yīng)性得分顯著高于Control組（P<0.01），而PTSD+p75NTR-ED-Fc組拒俘得分顯著低于PTSD組（P<0.05）；曠場實(shí)驗(yàn)：PTSD組與Control組的梳理次數(shù)、站立次數(shù)、靜止時(shí)間均有顯著性差異（P<0.01），PTSD+p75NTR-ED-Fc組大鼠在中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間顯著高于 PTSD組（P<0.01

7、）；高架十字迷宮：PTSD+p75NTR-ED-Fc組前往開臂的次數(shù)與開臂停留時(shí)間均顯著高于PTSD組（P<0.01）；在水迷宮實(shí)驗(yàn)：PTSD組與Control組在定位航行的第2、3、6天第一次尋靶潛伏期無顯著性差異，而PTSD組在第1、4、5天潛伏期顯著性延長（P<0.01），PTSD+p75NTR-ED-Fc組的與PTSD組在定位航行的第1、4、5天有顯著性差異；空間探索實(shí)驗(yàn)中，PTSD+p75NTR-ED-Fc組與PTSD組在象限

8、停留時(shí)間與穿臺(tái)次數(shù)也有顯著性差異。上述結(jié)果表明，側(cè)腦室注射p75NTR-ED-Fc能在一定程度上降低攻擊行為和逃避行為、增加其活動(dòng)能力、緩解焦慮狀態(tài)、增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶水平，對(duì)PTSD大鼠行為學(xué)具有一定程度的改善作用。②組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：Control組 CA3區(qū)細(xì)胞密集均勻分布，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞大小均一，CA1區(qū)椎體細(xì)胞的基樹突數(shù)目較多，且輻射層中椎體細(xì)胞的頂樹突干均勻發(fā)出側(cè)枝；PTSD組 CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清晰，細(xì)胞碎片多，CA1區(qū)椎

9、體細(xì)胞數(shù)目幾乎可數(shù)，分布稀疏，且只有少數(shù)椎體細(xì)胞著色；PTSD+p75NTR-ED-Fc組CA3區(qū)細(xì)胞密集，形態(tài)大小無明顯差異，結(jié)構(gòu)較清晰，CA1區(qū)的輻射層中可見明顯的椎體細(xì)胞，分布均勻，分支夾角大，DG區(qū)可見多個(gè)大型苔蘚細(xì)胞，密集程度明顯比PTSD高。表明，p75NTR-ED-Fc對(duì)PTSD大鼠的行為學(xué)改善作用可能與海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及樹突棘數(shù)目及形態(tài)有關(guān)。③分子機(jī)制實(shí)驗(yàn)結(jié)果：TUNEL凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示，與Control組相比，PT

10、SD組海馬凋亡神經(jīng)元數(shù)量顯著偏高，且海馬體DG區(qū)Bcl-2、SynapsinI及pCREB表達(dá)水平顯著降低，而 p75NTR、Caspase-3及ROCK-2表達(dá)量則顯著上調(diào)。而與PTSD組比，PTSD+p75NTR-ED-Fc組海馬DG區(qū)被TUNEL染色標(biāo)記的陽性細(xì)胞數(shù)量顯著降低（P<0.01），且 Bcl-2、SynapsinI及 pCREB的表達(dá)量明顯上調(diào)，而p75NTR、Caspase-3及ROCK-2的表達(dá)量則顯著下調(diào)。提示，