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文檔簡介
1、目的:
骨髓間充質(zhì)干細胞移植,是臨床治療中樞神經(jīng)損傷性疾病的極具前景的方法之一。由于MSCs源性神經(jīng)細胞易于凋亡,因而如何抑制其凋亡的發(fā)生,延長被移植細胞的存活時間是目前急待解決的關(guān)鍵問題。因此,闡明MSCs源性神經(jīng)細胞的凋亡規(guī)律,探討應(yīng)用相關(guān)細胞凋亡抑制劑延長其存活時間等也是骨髓間充質(zhì)干細胞移植研究領(lǐng)域中,急需解決的問題。在腦缺血疾病和神經(jīng)退行性疾病中,神經(jīng)細胞凋亡是十分重要的發(fā)病機制。在這些情況下,神經(jīng)細胞凋亡增強的機
2、制與p75NTR的高表達密切相關(guān)[1-5]。
針對這些關(guān)鍵性問題,本研究擬從大鼠骨髓中提取間充質(zhì)干細胞,并誘導(dǎo)、分化為神經(jīng)細胞。在此基礎(chǔ)上,觀察MSCs源性神經(jīng)細胞的凋亡情況。并同時觀察p75NTR在凋亡中的作用,為今后抑制MSCs源性神經(jīng)細胞的凋亡,延長其存活時間尋找新的靶點。
方法:
從大鼠骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細胞,體外傳代培養(yǎng)后,誘導(dǎo)其向神經(jīng)細胞分化。應(yīng)用免疫熒光印跡的方法檢測誘導(dǎo)后神經(jīng)
3、細胞表面的標(biāo)記物nestin、NF-200及GFAP。應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測誘導(dǎo)后神經(jīng)細胞的凋亡。應(yīng)用RT-PCR及westernblot觀察骨髓間充質(zhì)干細胞來源神經(jīng)細胞凋亡與p75NTR的關(guān)系,進一步應(yīng)用p75NTR抑制劑,研究其對誘導(dǎo)的神經(jīng)樣細胞凋亡的影響。
結(jié)果:
體外誘導(dǎo)后,骨髓間充質(zhì)干細胞90%以上向神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)化,同時表面標(biāo)記物nestin在0h、6h、12h、和24 h表達分別為53.1±5.3、92
4、.6±1.4、78.6±4.2和30.5±3.4;NF-200在6h、12h、和24 h表達分別為89.3±3.9、92.6±2.2and96.8±1.9; GFAP表達為陰性。誘導(dǎo)后0h、6h、12 h和24 h神經(jīng)細胞凋亡檢測結(jié)果分別為2.84±0.32、2.22±0.43、8.77±0.86和13.85±1.68。RT-PCR結(jié)果為6h、12h、24h可檢測到p75NTR表達。Western blot結(jié)果為6h、12h、24h可檢
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