Oatp2介導(dǎo)的燈盞乙素肝臟轉(zhuǎn)運機制的研究.pdf

1、目的:從整體動物水平和細胞水平研究燈盞乙素在肝臟中的攝取轉(zhuǎn)運過程,通過普伐他汀與燈盞乙素的相互作用研究,考察燈盞乙素在小鼠肝臟轉(zhuǎn)運過程中與oatp2的關(guān)聯(lián)性。通過對燈盞乙素在肝臟攝取轉(zhuǎn)運的研究,進一步明確燈盞乙素的藥代動力學(xué)特點,進而豐富燈盞乙素藥理學(xué)特征,為燈盞乙素的臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.研究普伐他汀對燈盞乙素在小鼠肝臟攝取轉(zhuǎn)運的影響。
　　 1.1建立燈盞乙素生物樣本的RP-HP

2、LC檢測方法。
　　 1.2采用完全隨機設(shè)計,將180只雄性昆明小鼠隨機分成A、B、C三組,每組60只,尾靜脈注射燈盞乙素50 mg/kg。A組:普伐他汀高劑量灌胃預(yù)處理+燈盞乙素,B組:普伐他汀低劑量灌胃預(yù)處理+燈盞乙素,C組:蒸餾水灌胃預(yù)處理+燈盞乙素。通過不同給藥方案,測定不同時間點的血漿藥物濃度及肝臟組織藥物濃度,考察普伐他汀對燈盞乙素的藥動學(xué)及其肝臟組織攝取的影響。
　　 2.研究普伐他汀對燈盞乙素在原代小鼠肝

3、細胞中的攝取轉(zhuǎn)運影響。
　　 2.1建立小鼠原代肝細胞的分離方法和小鼠肝細胞體外溫孵體系,建立燈盞乙素及普伐他汀細胞樣本的RP-HPLC檢測方法。
　　 2.2建立PCN誘導(dǎo)小鼠肝臟細胞oatp2高表達模型。
　　 2.3實驗分為四組:a組:空白肝細胞懸液組,b組:經(jīng)PCN誘導(dǎo)的空白肝細胞懸液組,c組:經(jīng)PCN誘導(dǎo)的肝細胞懸液加入5βg/ml普伐他汀組,d組:經(jīng)PCN誘導(dǎo)的肝細胞懸液加入10βg/ml普伐他汀組。

4、四組肝細胞懸液中分別加入不同量的燈盞乙素,使各組肝細胞懸液中燈盞乙素的初始濃度分別為12βg/ml、24βg/ml。通過不同組新鮮肝細胞實驗,考察燈盞乙素的肝臟攝取情況,進一步探討oatp2與燈盞乙素肝臟攝取轉(zhuǎn)運之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1.建立的血漿樣本、肝臟組織樣本及細胞樣本的RP-HPLC檢測方法符合生物樣本分析的要求。建立了成熟的小鼠原代肝細胞的分離方法和小鼠原代肝細胞溫孵體系,建立了小鼠在體誘導(dǎo)肝細胞高

5、表達oatp2的實驗?zāi)Ｐ汀?br>　　 2.整體實驗結(jié)果:小鼠血漿中燈盞乙素的T1/2β(h)沒有差異,A、B、C組分別為0.439、0.426、0.435;CL(L/h/kg)有變化趨勢,A、B、C組分別為2.005、2.546、3.045;A、B、C組的AUC(0-2)(mg/L·h)分別為24.290、19.197、16.169。普伐他汀灌胃能影響燈盞乙素的藥動學(xué)特征,A組、B組小鼠燈盞乙素血漿中的AUC(O-2)(mg/L·h

6、)分別比C組增加了13.20％和40-56％。
　　 3.離體細胞實驗結(jié)果:原代小鼠肝細胞懸液加入低劑量燈盞乙素時,燈盞乙素5min時間點測定的消失率a、b、c、d組分別為:16.33±1.78％、21.58±1.08％、15.25±2.92％、12.25±1.33％;肝細胞懸液加入高劑量燈盞乙素時,燈盞乙素5min時間點測定的消失率a、b、c、d組分別為:16.29±2.29％、20.37±1.17％、14.97±1.71％、