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文檔簡(jiǎn)介
1、研究背景: 胰腺癌是高度惡性腫瘤之一。吉西他濱單藥化療是晚期胰腺癌標(biāo)準(zhǔn)一線治療,其療效不理想。究其原因之一是胰腺癌化療敏感性低。前期研究我們發(fā)現(xiàn)MDR-1和RRM1在SW1990對(duì)吉西他濱化療抵抗中發(fā)揮重要的作用。另外,晚期患者出現(xiàn)貧血多見(jiàn),輸血或使用促紅細(xì)胞生成素(Epo)是改善血紅蛋白水平的有效措施。 Epo主要是通過(guò)促進(jìn)紅細(xì)胞的生成,提高患者的血紅蛋白的濃度,減少臨床輸血,達(dá)到改善腫瘤患者的生活質(zhì)量,進(jìn)而提高腫瘤的
2、控制率以及患者的生存期。然而Ⅲ期臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)多種腫瘤患者使用重組人紅細(xì)胞生成素后無(wú)病生存期及總生存期均下降。2007年FDA發(fā)布警告:建議慎用Epo治療癌性貧血。盡管如此,還是有不少研究發(fā)現(xiàn)Epo不會(huì)惡化腫瘤患者的生存。研究發(fā)現(xiàn)促紅細(xì)胞生成素受體(EpoR)不僅存在紅系祖細(xì)胞胞膜上,而且多種腫瘤細(xì)胞同樣表達(dá)EpoR。體內(nèi)體外研究還發(fā)現(xiàn)EpoR在腫瘤細(xì)胞中可能有功能性表達(dá),影響腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、化放療敏感性以及腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力。
3、 鑒于目前Epo對(duì)腫瘤治療的影響尚不確定,而報(bào)道Epo對(duì)胰腺癌細(xì)胞株產(chǎn)生影響的相關(guān)研究較少,通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞中是否表達(dá)EpoR以及EpoR是否存在功能,可能將為臨床合理應(yīng)用Epo提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究目的: 觀察促紅細(xì)胞生成素對(duì)胰腺癌細(xì)胞株SW1990增殖活性和吉西他濱化療敏感性的影響,并初步探討其中可能的機(jī)制。 材料和方法: 1.材料 1)SW1990胰腺癌細(xì)胞株購(gòu)于中山大
4、學(xué)動(dòng)物中心 2)主要試劑:RPM1640干粉培養(yǎng)基(Gibico-BRL公司),胎牛血清(杭州四季青公司),胰蛋白酶(Amresco公司),重組人紅細(xì)胞生成素注射液(麒麟鯤鵬中國(guó)生物公司惠贈(zèng)),兔抗人EpoR抗體(Santa Cruz公司),吉西他濱(美國(guó)禮來(lái)公司惠贈(zèng)),四氮唑鹽(Sigma公司),二甲基亞砜(Sigma公司),Trizol(invitrogen公司),逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TakaRa),PCR酶(TakaRa),DA
5、B顯色試劑盒等。 3)主要儀器:Wellscan MK3自動(dòng)分析酶標(biāo)儀(Labsystem Dragon,美國(guó)),梯度PCR儀(Biomeera,德國(guó)),凝膠成像儀(BXT-20-M),各種顯微鏡等2.方法免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)SW1990中EpoR的表達(dá),MTT法檢測(cè)Epo對(duì)SW1990細(xì)胞增殖以及吉西他濱化療敏感性的影響,RT-PCR法檢測(cè)Epo對(duì)MDR-1、RRM1在SW1990中表達(dá)的影響。對(duì)各作用組的光密度值、抑制率以及M
6、DR-1/β-actin和RRml/β-actin比值進(jìn)行多組數(shù)據(jù)的方差分析;并對(duì)化療敏感性(抑制率)與腫瘤化療抵抗相關(guān)基因表達(dá)強(qiáng)度(MDR-1/β-actin或RRml/β-actinLg值)進(jìn)行直線相關(guān)性分析;對(duì)吉西他濱化療抵抗?jié)舛扰c腫瘤化療抵抗相關(guān)基因表達(dá)強(qiáng)度(MDR-1/β-actin或RRml/β-actin比值)進(jìn)行直線相關(guān)性分析。所有統(tǒng)計(jì)過(guò)程均由SAS8.0軟件完成。 結(jié)果: 1)EpoR在SW1990細(xì)胞
7、中表達(dá)。顯微鏡下,棕褐色物質(zhì)主要分布在細(xì)胞膜上。 2)0-10U/mlEpo作用組的0D630平均值分別是0.597,0.645,0.690,0.630,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.377)。 3)2—10U/mlEpo處理組吉西他濱對(duì)SWl 990的抑制率平均值分別是35.6%、33.1%、29.9%,明顯低于對(duì)照組的64.0%,P=0.004。不同濃度Epo處理組抑制率相近,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
8、4)0-10U/mlEpo作用組的MDR—1/β—actin比值分別是0.42,0.58,0.60,0.68;RRMl/β—actin比值分別是1.32,1.64,1.57,1.67。方差分析發(fā)現(xiàn)Epo處理組的MDR-1、RRM1基因表達(dá)均明顯高于對(duì)照組。P值分別是0.012,0.029。但是,Epo處理組之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p>0.05。 5)直線相關(guān)性分析得出,Epo作用后,吉西他濱對(duì)SW1990的抑制率與IdDR-1/β
9、—actin和RRml/β—actin的灰度比值均成負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別是-0.964(p=0.036)和-0.968(p=0.032)。 6)直線相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)胰腺癌細(xì)胞吉西他濱化療抵抗?jié)舛扰cMDR-1/β—actin和RRml/β—actin的灰度比值均呈現(xiàn)相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)分別是0.960(p=0.002)和0.966(p=0.002)。 結(jié)論1)胰腺癌細(xì)胞株SW1990表達(dá)EpoR; 2)Epo似不能刺激S
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