CL-316243對小鼠脂肪細胞中UCP1表達的影響及相關(guān)通路的探討.pdf

1、研究背景：
　　人和哺乳動物體內(nèi)有兩種脂肪組織，即白色脂肪組織(White adipose tissue，WAT)和棕色脂肪組織(brown adipose tissue，BAT)。WAT由幾乎沒有線粒體的大單房細胞組成，通過甘油三酯儲存能量;而BAT則是由含有大量線粒體的小多房細胞組成，并通過線粒體及表達解偶聯(lián)蛋白1(un coupling protein1，UCP1)產(chǎn)熱來消耗能量。以前認為胎兒及新生兒期棕色脂肪較多，并隨著年

2、齡的增長而逐漸減少至消失，但近來研究表明它仍在成人中存在，并對維持體溫和能量平衡起重要作用。線粒體內(nèi)膜的解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)是一種在棕色脂肪組織中特異表達的線粒體內(nèi)膜蛋白質(zhì)，能增加機體產(chǎn)熱，是決定BAT功能的關(guān)鍵因素。
　　近年來，隨著生活方式的改變和生活水平的提高，超重和肥胖也迅速蔓延開來，尋求高效的減肥藥物成為了當(dāng)前研究的熱點。選擇性β3腎上腺素能受體激動劑能刺激白色脂肪組織的脂解作用和棕色脂肪組織的非顫栗性產(chǎn)熱，抑制脂肪

3、細胞的分化，并能誘導(dǎo)白色脂肪組織中出現(xiàn)棕色脂肪細胞，從而消耗儲脂，起到抗肥胖作用，因此引起了大家的關(guān)注。CL-316243作為一種選擇性β3腎上腺素能受體激動劑，它是否能誘導(dǎo)白色脂肪組織中出棕色脂肪細胞及其中涉及到的細胞信號傳導(dǎo)途徑需進一步研究。
　　目的：
　　探討β3腎上腺素能受體激動劑(β3-adrenocepto ragonist，β3-ARs)CL-316243對小鼠脂肪細胞中解偶聯(lián)蛋白1(un coupling

4、protein1，UCP1)表達的影響及其是否涉及環(huán)磷酸腺苷(cyclase adenosine monophos phate，cAMP)-蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)和p38/絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)信號通路。
　　實驗方法：
　　將3T3-L1前脂肪細胞誘導(dǎo)成為脂肪細胞，采用油紅O染色法鑒定脂肪細胞。將脂肪細胞分為4組:對

5、照組(A)，10-7mol/LCL-316243聯(lián)合10μmol/L的PKA抑制劑H-89組(B)，10-7mol/LCL-316243聯(lián)合10μmol/L的p38MAPK抑制劑SB203580組(C)，10-7mol/LCL-316243組(D)。各組中試劑作用脂肪細胞48h后，提取A和D組中細胞總蛋白，BCA法測定蛋白濃度，然后酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）檢測

6、A和D組細胞中蛋白激酶A(Protein Kinase A，PKA)的濃度，蛋白質(zhì)印跡法(Westernblot)檢測A和D組細胞中p38的磷酸化程度;提取4組細胞總RNA，RT-PCR法檢測各組細胞中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果：
　　1.10-7mol/LCL-316243組(D)中PKA的濃度為（412.76±6.94）U/L，較對照組(A)中PKA的濃度(336.45±5.52)U/L明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)

7、意義（P＜0.05）。
　　2.10-7mol/LCL-316243組(D)中p38的磷酸化程度即p-p38/p38為（54.69±2.39）％，較對照組中p38磷酸化程度（42.03±1.28）％明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.A、B、C和D組中的UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平分別為:（0.43±0.01）、（0.43±0.01）、（0.44±0.01）、（0.58±0.01），因此①10-7mol/LC

8、L-316243組(D)中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平較對照組(A)和10-7mol/LCL-316243聯(lián)合PKA抑制劑H-89組(B)均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而10-7mol/LCL-316243聯(lián)合H-89組(B)中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平與對照組(A)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，說明CL-316243作用于小鼠脂肪細胞后可促進UCP1的表達，并可能涉及到cAMP-PKA信號通路;②10-7mol/L

9、CL-316243組(D)中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平較對照組(A)和10-7mol/LCL-316243聯(lián)合p38MAPK抑制劑SB203580(C)均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而10-7mol/LCL-316243聯(lián)合SB203580組(C)中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平與對照組(A)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明在CL-316243促進小鼠脂肪細胞中UCP1的表達過程中，p38/MAPK信號通路也可能起一