銀杏葉聚戊烯醇（GP）的分離和衍生物合成機(jī)理及生物活性研究.pdf

1、銀禽葉聚戊烯醇(GP)是銀杏葉中新的有效類脂化合物，與人體多萜醇結(jié)構(gòu)相似，參與糖蛋白的生物合成，目前國內(nèi)外尚未開發(fā)利用。 本文以銀含葉為原料，研究GP提取分離機(jī)理和純化工藝；聚戊烯基磷酸酯(GPP)衍生物的合成機(jī)理，探討了GP和GPP保護(hù)肝損傷、抗腫瘤和抗病毒藥效和藥理，為GP保健制劑和新藥開發(fā)提供基礎(chǔ)。 首次系統(tǒng)研究GP分析的方法，建立了GP的TLC、RP-TLC定性和HPLC定量分析方法。以C95-prenol聚戊烯

2、醇為外標(biāo)法，分析不同樹齡和采集時期的GP，GP富集在春季最低，在秋季增幅最快，最佳采集時間是9-10月。苗葉經(jīng)過精制處理，GP精制品不僅得率在0.7％~0.9％間，而且含量在90％左右。 首次系統(tǒng)研究不同提取方式對提取GP的影響，超聲波提取效果最好，GP提取率達(dá)90％左右，純度達(dá)18.6％。索氏抽耳義法作為工業(yè)生產(chǎn)首選，GP提珥義率高達(dá)80％以上，純度16％-19％。 采用皂化反應(yīng)和溶劑冷凍分離聚戊烯醇不皂化物，皂化劑為

3、5％NaOH- EtOH，石油醚軟膏與皂化劑的比例為1：5(g/ml)。溶劑A冷凍溫度-10℃至-20℃，溶劑B冷凍溫度-20℃以下，溶劑A母液中聚戊烯醇為55.6％，GP回收率為98.5％，溶劑B沉淀物中聚戊烯醇含量64.7％，GP 回收率為90％。 采用介質(zhì)分離聚戊烯醇不皂化物，不同介質(zhì)對GP分離的效果為硅膠>氧化鋁>NKA-2>聚酰胺>D101。首次采用分子短程蒸餾分離聚戊烯醇不皂化物，餾余物中聚戊烯醇出不皂化物中的46.

4、2％提高到83.7％，而且無溶劑殘留，是工業(yè)化制備高純度聚戊烯醇理想的分離方法。采用二級分子蒸餾分離和溶劑重結(jié)晶甾醇類化合物，銀杏葉甾醇收率為0.03-0.08％，純度大于95％。利用GC-MS分析，其中8個是甾醇類化合物，除β-谷甾醇外，其它銀含葉甾醇是首次報道。 首次以GP為原料，分別合成聚戊烯基氯磷酸酯、聚戊烯基磷酸單酯(GPP)和聚戊烯基磷酸二乙酯等衍生物，反應(yīng)產(chǎn)物收率高于80％。由IR、<'1>H-NMR、<'13>C

5、-NMR和高分辨質(zhì)譜鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。 首次研究GP保護(hù)肝臟、體內(nèi)抗腫瘤和體外抗病毒的藥效學(xué)和藥理。結(jié)果表明GP無毒副作用，對CCl<,4>、D-Gal和酒精引起急性肝損傷有保護(hù)作用，能明顯改善CCl<,4>致大鼠慢性肝損傷的肝功能，對肝組織羥脯氨酸和膠原蛋白含量明顯降低，具有抗慢性肝細(xì)胞損傷和抗肝纖維化的作用。 GPP對移植性Heps、肉瘤S<,180>和艾氏癌EC荷瘤鼠的抑制作用明顯好于GP。 GP能延長EC荷

6、瘤鼠、荷人腦瘤SF763裸鼠和A549人肺腺癌荷瘤裸鼠的延命率，GP與CTX、PDD、ADM聯(lián)合化療Heps、S<,180>和EC荷瘤小鼠，具有很好的協(xié)同作同，明顯提高聯(lián)合化療率，聯(lián)合<'60>C<,0>放療Heps荷瘤鼠，其效果高于貞芪沖劑，具有輔助化放療的作用。 GP能明顯增加Heps荷瘤鼠胸腺指數(shù)，EC荷瘤鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)，GP可明顯提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)和吞噬功能，具有體液免疫作用；GP能提高S<,180>荷瘤小鼠腫瘤細(xì)

7、胞凋亡指數(shù)(APO)至6.35，促進(jìn)S<,180>荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞凋亡，使S<,180>，荷瘤小鼠CD<,4>/CD<,8>比值接近正常小鼠；GP可通過降低端粒酶活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的藥理作用。 GP對HepG 2215細(xì)胞和MDCK細(xì)胞無毒性，對HepG2215分泌的HBV DNA具有很好的抑制作用，GP為25μg/ml和12.5μg/ml的抑制率分別為75.9％和76.6％；GP對H<,3>N<,2>