胚胎干細(xì)胞分泌因子促進(jìn)肝臟纖維化及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分胚胎干細(xì)胞分泌因子對(duì)肝纖維化相關(guān)細(xì)胞的作用目的:
　　肝纖維化過程中，肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cell，HSC）和肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞在其中起著重要的作用，尤其是肝星狀細(xì)胞，在肝臟損傷早期被激活，轉(zhuǎn)變?yōu)槌杉±w維樣細(xì)胞，分泌細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，增加細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，抑制其降解。我們研究胚胎干細(xì)胞分泌因子對(duì)肝星狀細(xì)胞的作用，有助于了解其對(duì)肝纖維化的影響。
　　方法:
　　由于直接移植胚胎干細(xì)胞有形成畸胎瘤等

2、危險(xiǎn)，我們采用含胚胎干細(xì)胞分泌因子的上清培養(yǎng)液，即胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)基(ESC-S)，研究其對(duì)對(duì)肝星狀細(xì)胞和肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的作用。用ESC-S處理細(xì)胞后，觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和形態(tài)的變化，檢測(cè)其中基因的改變和蛋白表達(dá)的變化情況。
　　結(jié)果:
　　胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)液可活化肝星狀細(xì)胞，促進(jìn)其顯著增殖，細(xì)胞中的活化標(biāo)志物蛋白顯α-SMA和desmin著升高。ESC-S還可能通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)來(lái)促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的激活。M1型巨噬細(xì)胞

3、的分泌培養(yǎng)液對(duì)肝星狀細(xì)胞有促進(jìn)作用，而M2c型巨噬細(xì)胞的分泌培養(yǎng)液有抑制肝星狀細(xì)胞活化的作用。ESC-S對(duì)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞有抑制其生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其凋亡的作用。
　　結(jié)論:
　　胚胎干細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子對(duì)肝細(xì)胞有正向調(diào)節(jié)作用，而對(duì)肝細(xì)胞有損傷作用。
　　第二部分胚胎干細(xì)胞分泌因子對(duì)小鼠肝纖維化的影響
　　目的:
　　在前面的實(shí)驗(yàn)中我們可知ESC-S對(duì)肝星狀細(xì)胞有促進(jìn)和活化的作用，為進(jìn)一步明確ESC-S對(duì)肝臟纖維化的作用

4、，在小鼠體內(nèi)研究其對(duì)肝臟功能的影響。
　　方法:
　　我們構(gòu)建了四氯化碳肝纖維化模型，在注射四氯化碳的同時(shí)給予小鼠Con-M或ESC-S注射，共持續(xù)6周時(shí)間。6周后，對(duì)肝臟組織進(jìn)行冰凍切片，同時(shí)對(duì)這些肝組織切片進(jìn)行Sirius Red染色，觀察兩組肝組織中纖維化的程度。為進(jìn)一步探討ESC-S對(duì)小鼠肝臟的影響，我們將ESC-S通過腹腔注入小鼠體內(nèi)，每周注射3次，每次注射1ml，持續(xù)6周時(shí)間。6周后，將小鼠予以安樂死，從下腔靜脈

5、取血，并獲取肝臟標(biāo)本。
　　結(jié)果:
　　在ESC-S與四氯化碳共同注射的小鼠肝臟中，HSC的活化標(biāo)志物明顯增多，膠原蛋白在細(xì)胞外基質(zhì)中的沉積亦增加。在ESC-S獨(dú)立處理組小鼠中，血清肝酶升高明顯，細(xì)胞外基質(zhì)的沉積也較對(duì)照組多。ESC-S處理的小鼠肝臟中有較多的巨噬細(xì)胞富集。
　　結(jié)論:
　　ESC-S能夠啟動(dòng)并導(dǎo)致肝纖維化，富集M1型巨噬細(xì)胞到肝內(nèi)，加速肝臟損傷，而且在原有肝臟損傷的基礎(chǔ)上，輔助和加速了肝臟的纖維