microRNA-140在乳腺癌細胞中對Nrf2及其下游抗氧化基因的表達調(diào)控.pdf

1、Nrf2基因?qū)儆谵D(zhuǎn)錄因子CNC家族，含有堿性亮氨酸拉鏈(bZIP)結(jié)構(gòu)，是細胞抗氧化反應(yīng)中的重要轉(zhuǎn)錄因子。它通過與其下游基因啟動子區(qū)的抗氧化反應(yīng)元件ARE結(jié)合，誘導(dǎo)抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的表達，在氧化應(yīng)激和外源性有毒物質(zhì)損傷的防御機制中發(fā)揮重要的作用。Nrf2/ARE信號通路是近幾年抗氧化研究領(lǐng)域的熱點，該通路在抗腫瘤、抗應(yīng)激、抗凋亡、抗炎癥反應(yīng)、抗動脈粥樣硬化以及神經(jīng)保護等方面發(fā)揮著廣泛的細胞保護功能。目前Nrf2/ARE通路已經(jīng)成為

2、抗癌化學(xué)療法的新靶點，為癌癥的治療提供一條新途徑。
　　MicroRNAs(miRNAs)是一種長度約18-24個堿基大小的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，它通過與靶mRNA的3'UTR堿基配對，通過抑制mRNA的翻譯或直接使其降解，調(diào)控基因的表達。miRNA參與動植物許多復(fù)雜的生命過程，如生長發(fā)育、器官形成、細胞凋亡和細胞增殖。目前的研究表明，miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，多數(shù)miRNA基因位于與腫瘤形成相關(guān)性

3、脆弱基因位點。miRNA的異常表達與多種癌癥的發(fā)生密切相關(guān)，并且作為癌基因和抑癌基因參與調(diào)控腫瘤細胞的生長、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等。
　　目的本研究旨在揭示microRNA在乳腺癌細胞中對Nrf2及其下游基因表達的影響，并且探究miR-140對乳腺癌細胞生長以及氧化應(yīng)激的影響。
　　方法我們首先利用生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-140與Nrf2的結(jié)合位點，然后采用雙熒光報告系統(tǒng)檢測miR-140對Nrf23'UTR及啟動子上的8×A

4、RE熒光素酶報告基因活性的影響;同時以實時熒光定量PCR法和Western Bloting法檢測過表達miR-140和加藥刺激前后細胞中Nrf2及其下游基因的mRNA和蛋白的表達變化;最后，MTT法檢測轉(zhuǎn)染miR-140后，對于不同濃度H2O2處理的細胞，其生長能力及對氧化應(yīng)激敏感性的變化。
　　結(jié)果生物信息學(xué)結(jié)果顯示，miR-140與Nrf23'UTR具有保守的相互結(jié)合區(qū)域，過表達miR-140能夠顯著抑制Nrf23'UTR和A