益氣養(yǎng)陰消癥絡(luò)中藥對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護作用及對腫瘤壞死因子-α影響的實驗研究.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病微血管并發(fā)癥之一,晚期表現(xiàn)為糖尿病性腎小球硬化,是糖尿病致死、致殘的主要原因之一。其發(fā)病機制復雜,目前尚無特效療法,因此尋找治療DN的有效方法具有重大意義。本研究通過鏈脲佐菌素(streptozotosin,STZ)腹腔注射法建立DN大鼠模型,應(yīng)用益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥復方對其進行干預(yù),通過觀察實驗動物24小時尿蛋白定量、腎功能(Scr,BUN)、糖化血紅蛋白、腎臟

2、病理形態(tài)學變化以及腎皮質(zhì)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)mRNA水平,來明確該中藥復方對DN的治療作用,并探討其可能的發(fā)病機制,為該處方的臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:健康雄性Sprague-Dauley大鼠85只,體重230g±20g,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,測定尿糖和尿蛋白均為陰性后,經(jīng)背部切口行左腎切除術(shù)。2周后隨機選取10只作為正常組,其余大鼠給予一次性腹腔注

3、射STZ40mg/kg,正常組大鼠給予一次性腹腔注射等體積的0.1mol/L枸櫞酸緩沖液,72小時后測血糖,三次連續(xù)隨機尾靜脈血糖≥16.7mmol/L為糖尿病造模成功。將成模大鼠隨機分為5組:模型組、益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥低劑量組(簡稱低劑組)、益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥中劑量組(簡稱中劑組)、益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥高劑量組(簡稱高劑組)、厄貝沙坦組,每組15只。成模一周后,開始給藥,每日一次,中藥低、中、高劑量組分別給予中藥5.29g/kg/

4、d、10.58g/kg/d、21.16g/kg/d灌胃,厄貝沙坦組給予厄貝沙坦15mg/kg/d灌胃,正常組與模型組均灌服相應(yīng)量生理鹽水,共給藥12周。動物均以普通飼料喂養(yǎng),自由進食、飲水,室溫18-20℃,相對濕度40％-70％,12小時交替照明。實驗期間注意監(jiān)測血糖,對血糖≥26mmol/L的大鼠,皮下注射適量長效胰島素(0.5-4u)以避免酮癥,減少死亡。于給藥第12周末,禁食12小時,不禁水,留取各組大鼠24小時尿液,測定24小

5、時尿蛋白定量,3％戊巴比妥鈉麻醉動物并稱量體重,股動脈取血,摘取右側(cè)腎臟并稱重,計算肥大指數(shù),留取腎臟標本,光鏡、電鏡下觀察腎臟病理形態(tài)學變化,提取各組腎皮質(zhì)RNA,用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測TNF-αmRNA水平。
　　 結(jié)果:
　　 1:各組大鼠體重、右腎重、肥大指數(shù)(腎重/體重)與正常組相比,模型組和各治療組的體重明顯減輕(P＜0.05),模型組與各治療組相比,體重無明顯的差異(P＞0.05),

6、各治療組之間體重無明顯的差異(P＞0.05);右腎重各組間均沒有明顯的差異(P＞0.05);與正常組相比,模型組及各治療組的肥大指數(shù)明顯升高(P＜0.05),模型組與各治療組以及各治療組之間無顯著的差異(P＞0.05)。
　　 2:各組大鼠24小時尿蛋白定量與正常組相比,模型組及各治療組24小時尿蛋白定量均明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組和厄貝沙坦組24小時尿蛋白定量均明顯下降(P＜0.05);中藥各劑量組以

7、及厄貝沙坦組之間無顯著差異(P＞0.05)。
　　 3:各組大鼠糖化血紅蛋白的比較與正常組相比,模型組及各治療組糖化血紅蛋白均明顯增高(P＜0.05);模型組和各治療組以及各治療組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 4:各組大鼠腎功能的比較與正常組相比,模型組及各治療組大鼠血清肌酐水平均明顯增高(P＜0.05);與模型組相比,各治療組大鼠血清肌酐水平明顯降低(P＜0.05);各治療組之間血清肌酐水平無顯著差異(P＞

8、0.05)。與正常組相比,模型組及各治療組大鼠尿素氮水平均明顯增高(P＜0.05);與模型組相比,各治療組大鼠尿素氮水平明顯降低(P＜0.05);各治療組之間尿素氮水平無顯著差異(P＞0.05)。
　　 5:腎臟病理觀察:
　　 5.1:光鏡觀察正常組大鼠腎臟腎小球結(jié)構(gòu)完整,未見腎小球肥大,腎小球毛細血管基底膜、系膜細胞數(shù)量及系膜基質(zhì)無明顯改變;模型組大鼠腎臟腎小球肥大明顯,腎小球毛細血管基底膜增厚,系膜區(qū)增寬;各治療組

9、均有不同程度的病理改變,但與模型組相比較輕,為腎小球輕度的肥大,少量的系膜細胞和基質(zhì)的增多,各組間無明顯區(qū)別。
　　 5.2:電鏡觀察正常組顯示腎小球基底膜的結(jié)構(gòu)完整,毛細血管內(nèi)皮細胞和足細胞無異常;模型組顯示腎小球毛細血管基底膜增厚,系膜基質(zhì)的增多,且有足細胞足突融合;各治療組也都有不同程度病理改變,但較模型組輕,為腎小球毛細血管基底膜輕度的增厚,系膜基質(zhì)輕度的增生,且伴有部分足突融合,但各組間無明顯區(qū)別。
　　 6:

10、腎皮質(zhì)TNF-αmRNA水平的比較
　　 與正常組相比,模型組及各治療組腎皮質(zhì)TNF-αmRNA水平均明顯增高(P＜0.05);與模型組相比,各治療組腎皮質(zhì)TNF-αmRNA的水平均明顯降低(P＜0.05);各治療組間無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1:益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥可以減輕糖尿病腎病大鼠的腎臟病理損害,降低24小時尿蛋白定量,降低肌酐、尿素氮水平,保護腎功能。
　　 2:益氣養(yǎng)陰