甲胎蛋白陰性與陽性肝細胞癌臨床病理特征及基因表達譜差異研究.pdf

1、這一博士學位課題由兩部分研究工作構成。
　　第一部分甲胎蛋白陰性與甲胎蛋白陽性肝細胞癌臨床病理特征及預后研究
　　目的:甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)對于肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)術后的預后價值尚存爭議，本論文研究肝細胞癌術前血清AFP水平的預后價值，同時分析不同AFP水平肝癌患者的臨床病理特征。
　　方法:應用病例對照研究的方法，回顧性分析中國醫(yī)學科學

2、院腫瘤醫(yī)院251例接受手術治療的肝細胞癌患者的臨床病理資料，按術前血清AFP水平分組，以20ng/mL為截點值，分成AFP陰性組(0-20 ng/ml)和AFP陽性組(＞20 ng/ml)，其中AFP陰性組142例，AFP陽性組109例，比較兩組患者的臨床病理特征，采用Kaplan-Meier法計算生存率，以Log rank檢驗進行生存曲線比較，用Cox比例風險回歸模型分析影響術后肝癌患者預后的相關因素。
　　結果:與AFP陰性肝

3、癌比較，AFP陽性組患者的血漿凝血酶原時間較長、肝被膜受侵比例較高、組織分化較差、巴塞羅那臨床肝癌分期較晚(P＜0.05)。女性肝癌患者術前AFP水平高于男性患者(P=0.04)。AFP陰性組患者1、3、5年無復發(fā)生存率為78.1％、57.5％和40.6％，高于AFP陽性組患者1、3、5年無復發(fā)生存率61.8％、37.7％和31.4％，差異具有統(tǒng)計學意義（Log rank檢驗，P=0.004）。AFP陰性組患者1、3、5年生存率為94.

4、4％、83.8％和62.3％，高于AFP陽性組患者1、3、5年生存率87.2％、60.0％和36.7％，差異具有統(tǒng)計學意義(Log rank檢驗，P＜0.001)。Cox多因素分析結果顯示，AFP、腫瘤直徑和Edmondson-Steiner分級是影響肝癌患者預后的獨立因素(P＜0.05)，與AFP陰性肝癌相比，AFP陽性肝癌術后死亡風險增加了76.7％(OR=1.767，95％CI=1.108-2.816，P=0.017)。
　

5、　結論:AFP陽性組肝癌惡性程度高于AFP陰性組肝癌。女性肝癌患者術前AFP水平高于男性患者。術前血清AFP水平是判斷肝癌術后預后的重要因素。
　　第二部分甲胎蛋白陰性與甲胎蛋白陽性肝細胞癌基因表達譜差異研究
　　目的:肝細胞癌是具有不同臨床表現(xiàn)和分子生物學特征的異質性疾病。本研究通過分析比較AFP陰性和AFP陽性肝癌的mRNA表達譜差異，結合臨床資料，發(fā)現(xiàn)一組可能具有肝癌診斷和預后判斷價值的分子標志。
　　方法:采用

6、安捷倫4×44k基因芯片平臺，檢測合并乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)感染的20例AFP陰性和20例AFP陽性肝癌組織的mRNA表達譜，通過生物信息學分析，獲得差異表達基因。通過實時定量PCR(real time Quantiative PCR，real timePCR)和/或酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法驗證部分差異表達基因。
　　結果

7、:通過表達譜芯片分析，在AFP陰性和AFP陽性肝癌組織中發(fā)現(xiàn)352個差異表達基因。主成分分析顯示，AFP陰性肝癌組織高表達基因62個，主要參與細胞凋亡和程序性死亡等過程，AFP陽性肝癌高表達基因290個，主要參與有絲分裂和細胞周期等過程。real time PCR檢測IFNGR1（interferon gamma receptor1，干擾素γ受體1）、LAMB3(lamininβ3，層連蛋白β3)、MFSD2A(major facili

8、tator superfamilydomain containing2A，促進調解蛋白超家族2A)、RASD1(dexamethasone-inducedRAS related protein1，類固醇誘導的RAS相關蛋白1)、STARD5(StAR-related lipidtransfer domain containing5，StAR關脂質轉運蛋白5)和TRIM35(tripartite motifcontaining prote

9、in35，三結構域蛋白35)等在AFP陰性肝癌組織高表達的6個基因，結果顯示LAMB3、MFSD2A、STARD5和TRIM35在AFP陰性肝癌組織中的表達高于AFP陽性肝癌組織。肝癌患者血漿MFSD2A濃度顯著高于健康人，對于肝癌具有良好的診斷效能，ROC曲線的AUC值為0.8353(95％CI:0.7486-0.9220)，敏感性為74.16％，特異度為89.47％。并且，對于AFP陰性肝癌同樣具有良好的診斷效能，AUC值為0.83