親代應(yīng)激對后代焦慮行為的影響以及山羊卵泡液中卵丘擴(kuò)展抑制因子的定性.pdf

1、本文分為兩個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分:現(xiàn)代生活的不斷繁榮發(fā)展，使得人們的生活節(jié)奏越來越快，人們正在接受越來越多、越來越殘酷的社會和心理因素的挑戰(zhàn)。在現(xiàn)代社會生活中，女性擁有多重角色，不僅要做好傳統(tǒng)的家庭婦女的工作，越來越多的女性也進(jìn)入職場，因此，女性受到的各方面的壓力要更大一些。應(yīng)激引起的心理性疾病，如抑郁、焦慮等都可以造成女性不孕。目前，關(guān)于束縛應(yīng)激對雌性生殖功能影響的研究大都集中在妊娠期間。然而，妊娠前雌性動(dòng)物，暴露在慢性

2、應(yīng)激條件下，更能模擬日常生活中女性所受的應(yīng)激狀態(tài)。因此，我們在本實(shí)驗(yàn)中采用了這一實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停_展了慢性束縛應(yīng)激對后代焦慮行為的影響的研究。本實(shí)驗(yàn)以8周齡昆明白雌性或雄性小鼠作為研究對象，以慢性束縛應(yīng)激(8h/d，30 or60d)為心理應(yīng)激模型，研究了慢性束縛應(yīng)激對母鼠生殖性能（妊娠期、產(chǎn)仔數(shù)、性別比例）和后代焦慮行為（分別從行為學(xué)、分子學(xué)以及激素水平）的影響。
　　結(jié)果表明:
　　1.慢性束縛應(yīng)激母鼠一個(gè)月，對母鼠的妊娠率、

3、妊娠期、產(chǎn)仔數(shù)、性別比例等生殖性能沒有影響。所產(chǎn)的F1代，在高架十字迷宮中的開放臂停留時(shí)間稍高于對照組，但差異不顯著，進(jìn)入開放臂的次數(shù)也稍高于對照組差異不顯著。這說明慢性束縛應(yīng)激母鼠一個(gè)月的F1代的焦慮行為與對照組相比開始有下降的趨勢。在曠場實(shí)驗(yàn)的中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間稍高于對照組，進(jìn)入中央?yún)^(qū)的次數(shù)也稍高于對照組，并且CD/TD也稍高于對照組，但都差異不顯著。
　　2.慢性束縛應(yīng)激母鼠一個(gè)月，所產(chǎn)的F1代在測完高架十字迷宮后，測得的皮質(zhì)

4、醇濃度稍低于對照組測完高架后的血清中的皮質(zhì)醇濃度，但差異不顯著。測完行為的一周后，海馬中與焦慮相關(guān)基因GR和BDNF的表達(dá)量表達(dá)量相比于對照組，都沒有大的變化。
　　3.慢性束縛應(yīng)激母鼠兩個(gè)月，所產(chǎn)的F1代，在高架十字迷宮中的開放臂停留時(shí)間顯著高于對照組，進(jìn)入開放臂的次數(shù)也顯著高于對照組。在曠場實(shí)驗(yàn)的中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間顯著高于對照組，進(jìn)入中央?yún)^(qū)的次數(shù)也是顯著高于對照組，并且CD/TD也顯著高于對照組。
　　4.慢性束縛應(yīng)激母鼠

5、兩個(gè)月，所產(chǎn)的F1代在測完高架十字迷宮后，測得的皮質(zhì)醇濃度顯著低于對照組測完高架后的血清中的皮質(zhì)醇濃度。測完行為的一周后，海馬中與焦慮相關(guān)基因GR和BDNF的表達(dá)量表達(dá)量相比于對照組，都有顯著升高。
　　5.雙應(yīng)激兩個(gè)月的F1代在高架十字迷宮中，在開放臂的停留時(shí)間顯著高于對照組，進(jìn)入開放臂的次數(shù)也顯著高于對照組，在曠場實(shí)驗(yàn)中，在中央?yún)^(qū)域的停留時(shí)間顯著高于對照組，進(jìn)入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)也顯著高于對照組，并且CD/TD也顯著高于對照組。這

6、也說明雙應(yīng)激能顯著降低F1代的焦慮行為，并有增強(qiáng)降低焦慮行為的效應(yīng)的趨勢。
　　6.雙應(yīng)激兩個(gè)月，所產(chǎn)的F1代在測完高架十字迷宮后，測得的皮質(zhì)醇濃度顯著低于對照組測完高架后的血清中的皮質(zhì)醇濃度。在測完行為的一周后，海馬中與焦慮相關(guān)基因GR和BDNF的表達(dá)量相比于對照組都有顯著升高。
　　7.為了檢測慢性束縛應(yīng)激對F2焦慮行為的影響，在我們的實(shí)驗(yàn)中分別做了四種雜交組合，分別是對照母×對照公，焦慮下降母×焦慮下降公，焦慮下降母×

7、對照公，對照母×焦慮下降公。所產(chǎn)下的F2代，在高架十字迷宮的表現(xiàn)，應(yīng)激F2代都有焦慮下降的表現(xiàn)或趨勢。對焦慮下降母×焦慮下降公這一組合的F2代，測完高架后血清中皮質(zhì)醇的含量顯著低于對照組。海馬體內(nèi)GR和BDNF的表達(dá)量都顯著高于對照組。
　　8.在兩個(gè)月的慢性束縛應(yīng)激過程中，選取了8個(gè)時(shí)間點(diǎn)，當(dāng)天應(yīng)激結(jié)束后，用高架十字迷宮檢測焦慮行為，我們發(fā)現(xiàn)小鼠一直處于應(yīng)激狀態(tài)。另外，進(jìn)入開放臂的次數(shù)這項(xiàng)數(shù)據(jù)，從30天后，應(yīng)激組和對照組就差異不

8、顯著了。另外在我們選取的8個(gè)時(shí)間點(diǎn)，當(dāng)天應(yīng)激結(jié)束后，檢測血清中皮質(zhì)醇的含量。隨著應(yīng)激時(shí)間的增長，應(yīng)激小鼠血液中的皮質(zhì)醇含量是逐漸減少的。第一天含量最高，說明第一天應(yīng)激反應(yīng)最強(qiáng)烈，之后慢慢適應(yīng)應(yīng)激環(huán)境。從30天后到60天，皮質(zhì)醇水平趨于穩(wěn)定，應(yīng)激組水平始終比對照組高。
　　綜上所述，慢性束縛應(yīng)激母鼠一個(gè)月不能顯著降低F1代的焦慮行為，但是有下降的趨勢。慢性束縛應(yīng)激母鼠兩個(gè)月，能顯著降低F1代的焦慮行為。雙應(yīng)激能增強(qiáng)應(yīng)激對后代焦慮行為

9、的影響。慢性束縛應(yīng)激F0代的過程中，隨著應(yīng)激時(shí)間的增長，雖然小鼠在一定程度適應(yīng)了應(yīng)激環(huán)境，但始終處在一個(gè)應(yīng)激狀態(tài)。慢性束縛應(yīng)激母鼠兩個(gè)月的F1代之間相互雜交，產(chǎn)下F2代。F2代也在不程度上出現(xiàn)了焦慮水平下降。焦慮水平下降的F1代公鼠更容易影響F2代雌鼠的焦慮行為，焦慮水平下降的F1代母鼠更容易影響F2代公鼠的焦慮行為。
　　第二部分:排卵前一系列內(nèi)源性促性腺激素的刺激使得卵母細(xì)胞周圍緊實(shí)的卵丘細(xì)胞發(fā)生擴(kuò)展作用，我們稱之為卵丘擴(kuò)展或

10、粘液化。卵丘擴(kuò)展對于卵母細(xì)胞成熟、排卵、受精以及胚胎發(fā)育都有重要作用。研究證明在卵泡液中存在一種抑制卵丘擴(kuò)展的因子，稱之為CEIF（cumulus expansion inhibiting factors）。在我們的實(shí)驗(yàn)中我們研究了山羊卵泡液中CEIF的存在情況和初步定性以及山羊卵泡膜細(xì)胞對GVBD的作用。我們用種間測試系統(tǒng)，應(yīng)用小鼠的COCs檢測山羊大、中卵泡液以及山羊中卵泡中各種卵泡細(xì)胞分泌CEIF的情況，并CEIF進(jìn)行了初步的定性

11、分析。我們還檢測了山羊卵泡膜細(xì)胞和山羊卵泡液對小鼠GVBD的影響。
　　結(jié)果如下：
　　1.100％的山羊中卵泡液能把小鼠卵丘擴(kuò)展抑制在10％左右，因此中卵泡液中存在CEIF，而且70％的卵泡液都不能有效抑制小鼠COCs的卵丘擴(kuò)展，因此說明中卵泡液中的CEIF必須在高濃度下才能發(fā)揮作用。而對于大卵泡液，100％的濃度也不能有效抑制小鼠COCs的擴(kuò)展，因此山羊大卵泡液中不存在CEIF。
　　2.膜細(xì)胞條件化培養(yǎng)液能顯著抑

12、制小鼠COCs的擴(kuò)展，但是壁顆粒細(xì)胞以及卵丘細(xì)胞的條件化培養(yǎng)液均不能抑制小鼠的卵丘擴(kuò)展，說明小鼠卵泡膜細(xì)胞能分泌CEIF，而壁顆粒細(xì)胞和卵丘細(xì)胞都不能分泌CEIF。
　　3.山羊中卵泡液中亞油酸的含量是顯著高于大卵泡液中的含量的。但是膜細(xì)胞和卵丘細(xì)胞的條件化培養(yǎng)液中都不含有亞油酸。這說明中卵泡液中CFIF和膜細(xì)胞分泌的CEIF可能不是同一種物質(zhì)。這也說明CEIF可能是不止同一種物質(zhì)。在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加的亞油酸濃度與大卵泡液中測出的

13、亞油酸濃度一致時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)對小鼠和山羊的卵丘擴(kuò)展都不起抑制作用，而當(dāng)濃度提升至中卵泡液中亞油酸濃度時(shí)，會顯著抑制小鼠以及山羊的卵丘擴(kuò)展。
　　4.大卵泡液中的總的糖胺聚糖的含量是比中卵泡液中低的，并且卵丘細(xì)胞和膜細(xì)胞條件化培養(yǎng)液中總的糖胺聚糖的含量是很低的，而且兩中條件化培養(yǎng)液之間差異不顯著。對于肝素，中卵泡液中含量與大卵泡液相比差異不顯著，兩種條件化培養(yǎng)液中含量差異也不顯著。對于硫酸軟骨素B，結(jié)果是類似的，兩種卵泡液之間以及兩種

14、條件化培養(yǎng)液之間差異不顯著。
　　5.對于COCs，膜細(xì)胞條件化時(shí)不加激素，對于GVBD是完全不起抑制作用的，但是對于DOs，條件化培養(yǎng)基對GVBD是起促進(jìn)作用的。因此，如果山羊膜細(xì)胞產(chǎn)生這種抑制GVBD的因子，一定是激素依賴性的，并且通過卵丘顆粒細(xì)胞起作用。山羊的大卵泡液不能顯著抑制卵母細(xì)胞的GVBD，但是中卵泡卻能顯著抑制小鼠的GVBD。
　　綜上所述，山羊中卵泡液中含有CEIF，大卵泡液中不含有CEIF。山羊中卵泡液的