基于調(diào)節(jié)SDF-lα-CXCR4軸的腦脈通對腦缺血-再灌注老齡大鼠腦微血管生成機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　缺血性腦血管疾病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)作為臨床危、急、重病之一，發(fā)病既有其慢性復(fù)雜的病理基礎(chǔ)，又有其兇險多變的急性演變過程，且其發(fā)病率和死亡率均隨年齡增加而增高，嚴(yán)重危害老年人的身心健康。在我國，隨著老年人口的增多及老齡化社會的到來，深入研究老年缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制，尋求有效的治療方案已顯得十分迫切。近年來，治療性血管生成概念的引入，為 ICVD的治療提供了新的

2、思路。血管生成不僅是一個復(fù)雜的組織學(xué)和生物學(xué)過程，同時也是一個在動態(tài)平衡中的復(fù)雜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控變化的過程，而對此調(diào)控機(jī)制的深入研究既是全面認(rèn)知血管生成復(fù)雜過程的重要途徑，又可使我們進(jìn)一步明確 ICVD的病理生理特點，并為治療缺血性腦血管疾病開辟新的途徑。隨著對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在腦缺血/再灌注(I/R)血管生成中機(jī)制的研究，逐漸認(rèn)識到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)的血管生成在重構(gòu)新的血管網(wǎng)方面的作用，但有關(guān)I/R后血管生成尤其是老年血管生成方面的研究鮮見報道

3、。本課題在前期研究的基礎(chǔ)上，從通過評估神經(jīng)功能障礙評分的改變，觀察腦梗死面積及缺血腦組織病理損傷變化，運用免疫組化法研究α-SMA、SDF-lα、CXCR4蛋白陽性的表達(dá)變化來探討老齡大鼠腦 I/R腦微血管生成機(jī)制，并以此為切入點進(jìn)一步闡釋中藥復(fù)方腦脈通對腦微血管生成的促進(jìn)作用及其可能的作用機(jī)制。
　　目的：
　　1、通過比較青年組、老齡組、尼莫地平模型組和腦脈通模型組大鼠腦I/R后神經(jīng)功能障礙評分、腦組織缺血面積及缺血后腦

4、組織病理的變化，來探討老齡大鼠腦I/R后腦組織損傷特點及腦脈通對老齡大鼠I/R后腦組織的保護(hù)作用。
　　2、通過觀察青年組、老齡組、尼莫地平模型組和腦脈通模型組大鼠I/R后腦組織α-SMA蛋白的表達(dá)，來探討老齡大鼠腦I/R后腦組織α-SMA蛋白的表達(dá)規(guī)律及腦脈通對老齡大鼠I/R后腦組織微血管生成的促進(jìn)作用。
　　3、通過觀察青年組、老齡組、尼莫地平模型組和腦脈通模型組大鼠I/R后腦組織SDF-lα、CXCR4蛋白的表達(dá)，來探

5、討老齡大鼠腦I/R后腦組織SDF-lα、CXCR4蛋白的表達(dá)規(guī)律及腦脈通對SDF-lα、CXCR4蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　1、采用神經(jīng)功能綜合評分法、TTC染色法及光鏡技術(shù)觀察分別比較各組大鼠腦缺血態(tài)(I)3h再灌注(I/R)24h、3d、6d、12d時神經(jīng)功能障礙評分、腦組織缺血面積及缺血區(qū)腦組織病理損傷的改變。
　　2、采用免疫組織化學(xué)方法觀察各組大鼠腦缺血(I)3h再灌注(I/R)24h、3d、6d

6、、12d時腦組織α-SMA蛋白陽性表達(dá)變化。
　　3、采用免疫組織化學(xué)方法觀察各組大鼠腦缺血(I)3h再灌注(I/R)24h、3d、6d、12d時腦組織SDF-lα、CXCR4蛋白陽性表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1、老齡大鼠腦I/R后神經(jīng)功能障礙、腦組織梗死面積和腦組織病理改變及腦脈通對其改變的影響
　　1.1、神經(jīng)功能障礙與青年假手術(shù)組及老齡假手術(shù)組比較，各相應(yīng)模型組時間點神經(jīng)功能障礙綜合評分均減低（P<0.0

7、1，P<0.05），且其神經(jīng)功能障礙綜合評分隨時間的延長呈現(xiàn)減低趨勢，并在腦 I/R6d時神經(jīng)功能障礙評分最低（P<0.01），相對于I/R6d時，其神經(jīng)功能障礙在I/R12d呈減輕改變（P<0.05）；與青年模型組各相同時間點比較，老齡模型組I/R6d、I/R12d神經(jīng)功能障礙評分均減少（P<0.01，P<0.05）；與老齡模型組各相同時間點比較，腦脈通組、尼莫地平組各時間點神經(jīng)功能障礙評分均增加（P<0.01，P<0.05）；與尼莫

8、地平組相同時間點比較，腦脈通組I/R3d、I/R6d、I/R12d神經(jīng)功能障礙評分均增加（P<0.01，P<0.05）。
　　1.2、腦組織梗死面積與青年假手術(shù)組及老齡假手術(shù)組比較，各相應(yīng)模型組時間點腦組織梗死面積均增大，且其梗死面積隨時間的延長呈現(xiàn)增大趨勢，并在腦I/R6d時其梗死面積最大（P<0.01），相對于 I/R6d時，其梗死面積在I/R12d呈減小改變；與青年模型組各相同時間點比較，老齡模型組 I/R6d、I/R12d

9、時間點腦組織梗死面積增大（P<0.01，P<0.05）；與老齡模型組各相同時間點比較，腦脈通組、尼莫地平組各時間點腦組織梗死面積均減?。≒<0.01，P<0.05）；與尼莫地平組各相同時間點比較，腦脈通組I/R6d、I/R12d腦組織梗死面積均減?。≒<0.01，P<0.05），尤以12d為著（P<0.01）。
　　1.3、腦組織病理改變通過常規(guī)HE染色，光鏡下觀察各模型組大腦皮質(zhì)缺血中心區(qū)與半暗帶區(qū)腦組織損傷的病理變化發(fā)現(xiàn)，在I

10、3h開始出現(xiàn)組織水腫；I/R24h、I/R3d天時水腫程度逐漸加重，神經(jīng)纖維紊亂，血管間隙增寬；I/R6d時水腫達(dá)到高峰，同時可見大量神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞變性壞死，微血管結(jié)果破壞；I/R12d時水腫基本消失，神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)纖維減少，壞死液化灶出現(xiàn)。與青年模型組相同時間點比較，老齡各模型組水腫出現(xiàn)早，組損傷較嚴(yán)重，恢復(fù)速度較慢；與老齡模型組相同時間點相比，藥物干預(yù)各模型組病理組織損傷較輕，藥物可以明顯減輕老齡大鼠腦I/R病理損傷，尤

11、以腦脈通組腦保護(hù)作用為著。
　　2、老齡大鼠腦I/R后腦組織α-SMA蛋白表達(dá)變化及腦脈通對其表達(dá)的影響
　　免疫組化檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：青年假手術(shù)組和老齡假手術(shù)組腦組織內(nèi)均可見α-SMA蛋白弱陽性表達(dá)；與青年假手術(shù)組和老齡假手術(shù)組比較，各相應(yīng)模型組時間點腦組織α-SMA蛋白表達(dá)均增加，且其表達(dá)隨時間的延長呈現(xiàn)增加趨勢，并在腦I/R12d時表達(dá)最高（P<0.01）；與青年模型組相同時間點比較，老齡模型組各時間點腦組織α-SMA蛋白

12、表達(dá)均減少（P<0.01，P<0.05）；與老齡模型組相同時間點比較，腦脈通組、尼莫地平組各時間點腦組織α-SMA蛋白表達(dá)均增加（P<0.01，P<0.05）；與尼莫地平組相同時間點比較，腦脈通組各時間點腦組織α-SMA蛋白表達(dá)均增加（P<0.01，P<0.05）。
　　3、老齡大鼠腦I/R后SDF-lα、CXCR4蛋白表達(dá)變化及腦脈通對其表達(dá)的影響
　　免疫組化檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：青年假手術(shù)組和老齡假手術(shù)組腦組織內(nèi)均可見SDF-

13、lα、CXCR4蛋白弱陽性表達(dá)；與各相應(yīng)假手術(shù)組比較，各模型組各時間點腦組織 SDF-lα、CXCR4蛋白表達(dá)均增加，且其表達(dá)隨時間的延長呈現(xiàn)增加趨勢，并在腦 I/R6d時表達(dá)最高（P<0.01），相對于 I/R6d時，其表達(dá)在 I/R12d呈減少改變；與青年模型組各相同時間點比較，老齡模型組各時間點腦組織SDF-lα、CXCR4蛋白表達(dá)均減少（P<0.01，P<0.05）；與老齡模型組各相同時間點比較，腦脈通組、尼莫地平組各時間點腦組

14、織 SDF-lα、CXCR4蛋白表達(dá)均增加（P<0.01，P<0.05）；與尼莫地平組各相同時間點比較，腦脈通組各時間點腦組織SDF-lα、CXCR4蛋白表達(dá)均增加（P<0.01，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、隨著增齡，在相同損傷條件下，老齡大鼠腦 I/R后腦組織損傷出現(xiàn)早、程度重、恢復(fù)慢；隨著腦 I/R時間的延長，各模型組腦組織損傷均有不同程度的修復(fù)，與其他模型組相比，腦脈通可明顯改善老齡大鼠腦 I/R后組織的損傷

15、。
　　2、大鼠腦 I/R后，各模型組腦組織內(nèi)可見α-SMA蛋白表達(dá)，且隨著 I/R時間的延長，各模型組腦組織內(nèi)α-SMA蛋白陽性率表達(dá)逐漸升高，尤以腦脈通組表達(dá)相對較高，提示腦脈通促進(jìn)了老齡大鼠腦 I/R后腦組織微血管的生成。
　　3、大鼠腦 I/R后，各模型組腦組織內(nèi)可見 SDF-lα、CXCR4蛋白表達(dá)，尤以腦脈通組表達(dá)相對較高；腦脈通對老齡大鼠腦缺血再灌注后微血管生成的作用機(jī)制，可能與提高缺血半暗帶區(qū)信號效應(yīng)分子SD