海星質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及其提取物對成骨細(xì)胞影響.pdf

1、海星是傳統(tǒng)的民間中草藥，最開始記載于《本草綱目》。其中，關(guān)于海星質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究參差不齊，僅限于性狀鑒別，未見顯微鑒別、通識項檢查及有效成分含量測定等。海星已作為傷科接骨片的君藥用于治療骨傷愈合等，但關(guān)于海星對成骨細(xì)胞增殖分化活性研究較少，未見海星中活性成分對成骨細(xì)胞增殖分化的影響。因此，本論文進行了以下幾個方面的實驗:
　　1)以中國藥典2010版為標(biāo)準(zhǔn)，建立海星質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。通過顯微鑒別觀察其特征為:橫紋肌纖維有明暗相間的細(xì)密橫紋，

2、橫紋平直或呈微波狀，呈現(xiàn)長卵圓形，表面可以看見有細(xì)點或裂縫狀空隙;骨碎片呈現(xiàn)不規(guī)則形;皮膚碎片表面界限不分明，可看到有棕色顆粒色素物質(zhì);膠原纖維相互纏繞成團。通過對通識項（水分、總灰分、浸出物含量）檢查及海星中多糖、皂苷含量的測定，建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為水分含量不高于8.0％，總灰分含量不高于60％，水溶性浸出物含量不低于16％，70％醇溶性浸出物含量不低于10％。海星中多糖的含量不低于2.45％，皂苷的含量不低于1.33％。
　　2)通

3、過稀酸法和酶提法相結(jié)合的方式，從海星中分離出了多糖，并經(jīng)過sevag法脫蛋白、透析、雙氧水脫色等方法得到多糖粗品，為淺黃色粉末。測得其中糖含量為37.62％，蛋白含量為3.22％，SO42-含量是14.70％。經(jīng)過Molish反應(yīng)和Seliwanoff反應(yīng)確定多糖中含有醛糖殘基，不含酮糖。
　　3)采用70％乙醇反復(fù)提取方法，經(jīng)過石油醚脫脂、水飽和正丁醇萃取、丙酮沉淀以及大孔吸附樹脂層析，從海星中制得皂苷粗品。經(jīng)泡沫反應(yīng)、酸堿泡沫

4、反應(yīng)、α-萘酚反應(yīng)、三氯乙酸-氯仿反應(yīng)、氯仿-濃硫酸反應(yīng)、醋酐-硫酸反應(yīng)確定提取的海星皂苷是甾體皂苷，可能含有硫酸基。通過香草醛-高氯酸法確定最佳吸收波長是547nm，測得皂苷含量為32.32％。
　　4)通過貼壁組織塊酶消化法分離、培養(yǎng)，差速貼壁法純化得到原代成骨細(xì)胞。不同濃度多糖、皂苷提取物作用于原代成骨細(xì)胞后，MTT法檢測細(xì)胞增殖、測定ALP活性、茜素紅染色、定量檢測礦化結(jié)節(jié)形成。實驗證明，海星中多糖、皂苷提取物對成骨具有增