外源性uPA在兔椎間盤退變中作用的初步研究.pdf

1、目的：通過向兔椎間盤內(nèi)注射不同濃度外源性尿激酶型纖溶酶原激活劑（uPA），觀察其對椎間盤的影響，探討其在椎間盤退變發(fā)病過程中的可能作用。
　　 方法：健康6個(gè)月左右大白兔72只,2.5-3Kg，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組48只，陰性對照組16只，空白對照組8只。實(shí)驗(yàn)組：分為三個(gè)亞組，采用腰椎側(cè)前方倒八字入路暴露L4/5椎間盤，分別注射濃度為10、20、40 ng/μl的uPA各1μl。陰性對照組（生理鹽水組）：L4/5椎間盤內(nèi)注射1μl的生

2、理鹽水。空白對照組：不作任何處理。手術(shù)后分別于第3、6周處死相應(yīng)各組大白兔取相應(yīng)椎間盤,進(jìn)行大體觀察、HE染色、SABC法測基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）的表達(dá)及蛋白多糖含量測定。
　　 結(jié)果:（1）實(shí)驗(yàn)組光鏡下觀察隨著時(shí)間和濃度增加，纖維環(huán)排列逐漸紊亂，髓核含水量逐漸減少，色澤也逐漸渾濁。生理鹽水組椎間盤與空白對照組比較沒有明顯變化，都呈正常外觀，纖維環(huán)排列整齊，髓核豐富，色澤透亮。HE染色顯示：空白組椎間盤，纖維環(huán)仍保持著

3、致密的板層結(jié)構(gòu)，細(xì)胞成分較多,呈梭形纖維細(xì)胞樣或呈軟骨細(xì)胞樣。各實(shí)驗(yàn)組隨時(shí)間和濃度變化：髄核脊索細(xì)胞逐漸減少，并逐漸被纖維軟骨組織替代，纖維環(huán)與髄核之間失去明顯的界限。（2）免疫組化MMP-3表達(dá)結(jié)果：三周時(shí)空白組和生理鹽水組，MMP-3表達(dá)陽性率極低，其余實(shí)驗(yàn)組陽性率隨濃度增加而增高，各實(shí)驗(yàn)組與對照組及實(shí)驗(yàn)組之間都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。六周時(shí)MMP-3表達(dá)，實(shí)驗(yàn)各組與對照組及實(shí)驗(yàn)各組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），實(shí)驗(yàn)各

4、濃度組與三周時(shí)相同濃度組比較也有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（3）三周時(shí)鹽水組蛋白多糖含量與空白組比較變化不大，各實(shí)驗(yàn)組與空白及鹽水組比較降低明顯（P<0.05）,六周時(shí)鹽水組及實(shí)驗(yàn)組與空白對照組髓核蛋白多聚糖比較具有差異性（P<0.05），并且實(shí)驗(yàn)組蛋白多聚糖下降程度與uPA注射劑量及時(shí)間呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　 結(jié)論:（1）uPA作為一種細(xì)胞外基質(zhì)的降解酶系，可激活體內(nèi)基質(zhì)降解系統(tǒng)MMP-3，從而共同促進(jìn)軟骨降解，椎間盤退變。（