醫(yī)院鮑曼不動(dòng)桿菌感染的分子流行病學(xué)調(diào)查及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的：
　　 鮑曼不動(dòng)桿菌(AB)是重要的院內(nèi)感染病原菌之一,常表現(xiàn)為多重耐藥,易引起醫(yī)院獲得性肺炎、菌血癥、泌尿系統(tǒng)感染、腦膜炎、軟組織感染及腹腔內(nèi)感染等嚴(yán)重感染,臨床治療面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。因此加強(qiáng)對(duì)其耐藥性監(jiān)測(cè),研究其耐藥分子機(jī)制,對(duì)于控制和治療鮑曼不動(dòng)桿菌引起的醫(yī)院內(nèi)感染具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　 本研究監(jiān)測(cè)四年間鮑曼不動(dòng)桿菌的臨床分布特點(diǎn)和耐藥性變遷,篩選多重耐藥菌株,分析其同源性,測(cè)定主要的β-內(nèi)酰胺酶基因

2、型,分析產(chǎn)金屬酶SIM-1菌株的整合子結(jié)構(gòu),明確我院鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性、克隆相關(guān)性及主要的碳青霉烯酶基因型。
　　 材料和方法：
　　 1.收集我院2004年7月～2008年6月臨床分離的1370株鮑曼不動(dòng)桿菌,應(yīng)用VITEK-32型全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行菌種鑒定和藥敏試驗(yàn),部分藥物采用K-B法進(jìn)行藥敏試驗(yàn),應(yīng)用WHONET5.4軟件對(duì)菌株和藥敏數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,經(jīng)SPSS13.0軟件用χ2檢驗(yàn)對(duì)細(xì)菌耐藥率進(jìn)行分析。

3、r>　　 2.收集我院2008年10月～2009年6月臨床分離的33株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(MDRAB),應(yīng)用VITEK-32型全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行菌種鑒定,采用瓊脂稀釋法測(cè)定12種抗菌藥物的最低抑菌濃度(MIC)值,脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分析菌株的同源性,PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物序列分析明確主要的碳青霉烯酶和A類(lèi)β-內(nèi)酰胺酶基因型。
　　 3.選取上述33株MDRAB中的1株碳青霉烯類(lèi)耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(CRAB),采用E t

4、est法測(cè)定12種藥物的MIC值,三維試驗(yàn)檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶表型,PCR法擴(kuò)增和產(chǎn)物序列分析主要的碳青霉烯酶基因和整合子基因盒,堿裂解法抽提質(zhì)粒,接合和轉(zhuǎn)化試驗(yàn)檢測(cè)耐藥性的傳遞。
　　 結(jié)果：
　　 1.2004年7月～2008年6月四年間我院臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌占所有分離病原菌(包括革蘭陰性菌、革蘭陽(yáng)性菌和真菌)的10.23％(1370/13398),2004-2005年度、2005-2006年度、2006-2007年

5、度和2007-2008年度其檢出率分別位居第三位、第四位、第五位和第三位,表明該菌是院內(nèi)感染的常見(jiàn)病原菌之一。
　　 2.從標(biāo)本分布特點(diǎn)來(lái)看,歷年來(lái)各類(lèi)標(biāo)本的檢出率無(wú)明顯差異,總體上以痰液最多且占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)(87.74％),其次為分泌物(3.36％),其它標(biāo)本只占少數(shù)。從臨床科室分布情況來(lái)看,歷年來(lái)不同科室的檢出率無(wú)明顯差異,總體上以監(jiān)護(hù)病房最多(63.58％),其次為神經(jīng)內(nèi)科(9.20％)、神經(jīng)外科(8.61％)和呼吸內(nèi)科(5.

6、11％),存在明顯的科室集中趨勢(shì)。
　　 3.1370株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)17種常用抗菌藥物的敏感率都不高,只有阿米卡星(79.31％)、亞胺培南(58.58％)和氨芐西林/舒巴坦(53.50％)三種藥物的敏感率在50％以上,而氨芐西林、呋喃妥因、頭孢曲松、頭孢替坦和頭孢唑啉五種抗菌藥物的耐藥率均接近100％。2004年～2008年鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)亞胺培南和左旋氧氟沙星的耐藥率呈逐年上升趨勢(shì),且上升幅度較大。
　　 4.200

7、8年10月～2009年6月臨床分離的33株MDRAB的標(biāo)本來(lái)源以痰液最多見(jiàn)(84.8％),且在監(jiān)護(hù)病房檢出最多(51.52％)；對(duì)12種常用抗菌藥物的藥敏結(jié)果顯示,米諾環(huán)素的耐藥率最低(0),其次為多粘菌素B(39.4％),其它藥物的耐藥率均在75％以上,其中對(duì)革蘭陰性菌具有強(qiáng)大抗菌活性的亞胺培南和美羅培南的耐藥率達(dá)90.9％。
　　 5.33株MDRAB根據(jù)PFGE條帶分析發(fā)現(xiàn)其中30株屬于主要的流行克隆株A,并且可分為A1、

8、A2和A3共3個(gè)亞克隆,分布于7個(gè)不同的臨床科室；另有3株為散發(fā)克隆株B、C和D。
　　 6.33株MDRAB中有31株擴(kuò)增出blaOXA-51組基因,通過(guò)測(cè)序確認(rèn)為blaOXA-66基因；30株擴(kuò)增出blaOXA-23組基因,通過(guò)測(cè)序確認(rèn)為blaOXA-23基因；1株擴(kuò)增出blaSIM-1基因,通過(guò)測(cè)序確認(rèn)為blaSIM-1基因。未檢測(cè)出blaOXA-24組、blaOXA-58組和blalMP型、blaVIM型基因。2株b/a

9、OXA-51組基因陰性菌株經(jīng)PCR擴(kuò)增16S-23SrRNA基因,通過(guò)測(cè)序確認(rèn)1株為Acinetobacterbaylyi,1株為不動(dòng)桿菌基因種型3。ISAbal/OXA-23陽(yáng)性28株,ISAbal位于OXA-23基因上游34bp。未檢測(cè)出ISAbal/OXA-66陽(yáng)性菌株。
　　 7.33株MDRAB中有29株擴(kuò)增出blaTEM型基因,通過(guò)測(cè)序確認(rèn)為blaTEM-1基因。未檢測(cè)到blaSHV、blaPER、blaCTX-M-

10、1、blaCTX-M-2、blaCTX-M-9、blaVEB、blaGES和blaKPC型基因。
　　 8.1株Acinetobacter baylyi為產(chǎn)金屬酶SIM-1菌株,同時(shí)產(chǎn)OXA-23酶,且ISAbal/OXA-23陽(yáng)性,ISAbal位于OXA-23基因上游34bp。未檢測(cè)出blaOXA-51組、blaOXA-24組、blaOXA-58組和blaIMP型、blaVIM型基因,同時(shí)A類(lèi)β-內(nèi)酰胺酶TEM、SHV、PER

11、、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9、VEB、GES和KPC亦陰性。
　　 9.blaSIM-1基因位于Ⅰ類(lèi)整合子上,該整合子包含四個(gè)耐藥基因盒blaSIM-1、arr-3、catB3和aadAl。
　　 結(jié)論：
　　 我院鮑曼不動(dòng)桿菌的臨床分離率較高,多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重且存在同一克隆株的播散流行；MDRAB可產(chǎn)生多種β-內(nèi)酰胺酶:OXA-23、OXA-66、TEM-1和SIM-1,并且插入序列ISAb