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文檔簡介
1、目的:
制造糖尿病性膀胱?。?型糖尿病)的大鼠模型,探討NGF(nerve growth factor,神經生長因子)/P407(poroxamer407,泊洛沙姆407)即型凝膠聯(lián)合脂肪干細胞移植在糖尿病性膀胱病的大鼠模型中的治療作用及其可能的治療機制。
方法:
45只雄性12周齡的S-D大鼠,其中40只隨機平均分成5組,其中1組為正常對照組(N組),喂普通飼料,另外4組建立2型糖尿病模型:高脂飼料喂養(yǎng)1
2、個月后,分兩次(隔1周)經腹腔注射低劑量的鏈脲佐菌素(30mg/kg,streptozotocin,STZ),持續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)至實驗結束。STZ注射后三個月,對所有大鼠進行兩次空腹血糖測定。取5只大鼠,腹腔手術取出脂肪組織進行脂肪干細胞的分離和培養(yǎng),并用10ulEdU進行標記。制備含有NGF的P407即型凝膠。對糖尿病大鼠進行治療:第一組在膀胱壁注射0.3ml平衡鹽溶液(DM組,n=8),第二組在膀胱壁注射0.3mlNGF/P407即型
3、凝膠(A組,n=8),第三組在膀胱壁注射0.3mlADSC(B組,n=8),第四組在膀胱壁注射0.3mlNGF/P407即型凝膠+ADSC(C組,n=8)。治療1個月后,對所有大鼠進行尿流動力學測定,最后處死進行組織學檢查,包括免疫熒光測定細胞凋亡、神經分布及追蹤EdU,Masson特殊染色,免疫組化進行血管密度的定量,免疫印跡進行NGF在膀胱中表達的分析。
結果:
糖尿病組(DM/A/B/C組)中大鼠體重較正常組顯
4、著增加,血糖水平顯著升高。正常組大鼠膀胱內壓及排尿曲線正常,DM組排尿曲線異常,而治療組均有改善,正常排尿曲線比率較DM組顯著升高,而聯(lián)合治療組較單一治療組明顯改善。免疫熒光中EdU陽性細胞部分表現(xiàn)為SMA陽性。但殘留ADSC數(shù)量較注射劑量大幅減少。A/C組中膀胱組織中NGF水平明顯增加。DM組細胞凋亡數(shù)目明顯多于N組,而治療后細胞凋亡數(shù)量顯著減少,聯(lián)合治療組較單一治療組減少更明顯。在神經組織定量中,DM組較正常大鼠明顯減少,經過治療后
5、神經組織得到修復,聯(lián)合治療組效果更佳。與DM組相比,N組及治療組B/C中可見大量的CD31陽性細胞,ADSC治療能促進血管生成。
結論:
單一的選用ADSC或是NGF/P407即型凝膠治療是能夠改善糖尿病大鼠模型的膀胱功能。ADSC除了通過其分化功能,還能通過抑制細胞凋亡和促進血管生成來改善膀胱功能,而NGF/P407即型凝膠治療可以增加膀胱組織中NGF水平,二者聯(lián)合治療較單一治療對糖尿病大鼠膀胱膀胱功能的改善會更明
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