自體干細(xì)胞激活療法治療2型糖尿病大鼠的療效及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型，觀察骨髓干細(xì)胞(BSCs)動(dòng)員并誘導(dǎo)后對(duì)T2DM大鼠的降糖作用，研究其對(duì)骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(GLUT4)蛋白表達(dá)量的影響，探討該療法可能的降糖作用機(jī)制。
　　 材料和方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理
　　 40只雄性wistar大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為兩組:健康對(duì)照組（10只），喂予標(biāo)準(zhǔn)飼料;模型組（30只），高糖高脂飼料喂養(yǎng)2個(gè)月聯(lián)合單次小劑量鏈脲佐菌

2、素(STZ)30mg/kg腹腔注射，建立實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠模型。將模型組隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組、單純動(dòng)員組和動(dòng)員并誘導(dǎo)組，每組10只。其中單純動(dòng)員組和動(dòng)員并誘導(dǎo)組給予重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)3ug/kg.d，隔日一次，共28天，健康對(duì)照組和糖尿病對(duì)照組給予相同體積的含中和量胰島素的5％葡萄糖注射液皮下注射。動(dòng)員并誘導(dǎo)組自注射rh-CSF第2天起給予煙酰胺100mg/kg.d灌胃和促肝細(xì)胞生長素3mg/kg.d腹腔注射，

3、連續(xù)27天，健康對(duì)照組、糖尿病對(duì)照組和單純動(dòng)員組給予相同體積的高壓滅菌水灌胃和生理鹽水腹腔注射，以空腹血糖(FBG)、空腹血清胰島素(FINS)、穩(wěn)態(tài)模型的胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、大鼠體重作為檢測(cè)指標(biāo)，觀察干細(xì)胞體內(nèi)動(dòng)員并誘導(dǎo)的降糖作用。
　　 2.監(jiān)測(cè)的指標(biāo)及方法
　　 從治療開始，各組大鼠每周測(cè)一次體重和血糖。治療前和實(shí)驗(yàn)終止時(shí)分別取血測(cè)FINS（放免法），實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組大鼠給予10％水合氯醛3.5ml/k

4、g腹腔注射麻醉，心臟取血并用生理鹽水進(jìn)行心臟灌流，留取右下肢股四頭肌，提取骨骼肌細(xì)胞膜總蛋白，采用免疫沉淀和Western Blotting方法檢測(cè)骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體-4(GLUT-4)的蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合單次小劑量STZ腹腔注射后，大鼠FBG及FINS顯著高于健康對(duì)照組(p＜0.01)，HOMA-IR顯著升高(p＜0.01)。
　　 治療后，除健康對(duì)照組外各組動(dòng)物體重呈下

5、降趨勢(shì)，但模型組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，糖尿病對(duì)照組血糖持續(xù)在高水平，至給藥14天時(shí)，單純動(dòng)員組和動(dòng)員并誘導(dǎo)組血糖值分別下降16.38％(p＜0.05)、22.91％(p＜0.01)，至給藥28天結(jié)束，單純動(dòng)員組和動(dòng)員并誘導(dǎo)組血糖值分別下降23.90％、33.95％，和糖尿病對(duì)照組比較，單純動(dòng)員組差異有顯著意義(p＜0.05)，動(dòng)員并誘導(dǎo)組差異有極顯著意義(p＜0.01)。治療結(jié)束時(shí)，糖尿病對(duì)照組HOMA-I

6、R顯著高于健康對(duì)照組(p＜0.01)。與糖尿病對(duì)照組相比，治療后單純動(dòng)員組及動(dòng)員并誘導(dǎo)組FINS水平無明顯改變(p＞0.05)，而動(dòng)員并誘導(dǎo)組HOMA-IR顯著降低(p＜0.05)。
　　 (2)糖尿病對(duì)照組大鼠骨骼肌GLUT4蛋白表達(dá)量顯著低于健康對(duì)照組(p＜0.01)，治療后單純動(dòng)員組和動(dòng)員并誘導(dǎo)組GLUT4蛋白表達(dá)量顯著增加(p＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)重組人粒細(xì)胞集落刺激因子聯(lián)合促肝細(xì)胞生