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文檔簡介
1、目的:本實驗通過建立糖尿病大鼠模型,研究大鼠糖尿病膀胱病變(DCP)尿動力學(xué)特征及膀胱鏡下結(jié)構(gòu)的改變,動態(tài)地研究糖尿病大鼠膀胱中NGF(nervegrowth factor)與DCP發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,對DCP的治療提供了新的手段及其實驗室理論依據(jù)。
方法:白色雄性SD大鼠65只,隨機分為2組即對照組、糖尿病注射STZ組,正常組30只,糖尿病組35只。給與糖尿病大鼠模型組大鼠按60mg/kg腹腔注射STZ;正常組30只大鼠不做任何
2、處理,作為正常對照組。96小時后測大鼠尾靜脈隨機血糖,96小時后隨機血糖>16.67mmol/L確定為糖尿病造模成功。正常飼養(yǎng)到第6周、第9周和第12周時,每組隨機抽取10只大鼠,放入代謝籠中,稱重并收集稱量24h尿量。測量體重、血糖后對各組大鼠進行尿動力學(xué)測定,測定指標包括誘發(fā)排尿的膀胱閾容量,剩余尿量,膀胱最大排尿壓和順應(yīng)性等指標。大鼠膀胱測壓完成后從后尿道部離斷膀胱,保留標本分為4份。標本處理后一部分用于HE染色和masson三色
3、法特殊染色后光鏡下觀察膀胱粘膜逼尿肌及膠原蛋白、彈性蛋白的變化;一部分標本用于電鏡下觀察膀胱逼尿肌的超微結(jié)構(gòu)的改變;剩下的膀胱組織用于通過western blot和RT-PCR技術(shù)測定每個時間點大鼠膀胱組織中NGF蛋白水平表達和NGF mRNA產(chǎn)物的含量變化。
結(jié)果:糖尿病大鼠造模成功后,糖尿病組大鼠開始出現(xiàn)多飲、多食、多尿,體重減輕形體消瘦。糖尿病組大鼠制模后各時間點體重較正常組前出現(xiàn)明顯下降,尿量較正常組明顯增多。(1)尿
4、動力結(jié)果:在6、9、12周行尿動力檢查發(fā)現(xiàn)糖尿病組大鼠的最大膀胱容量(閾容量)較正常組明顯增加并隨病程延長逐漸增加;最大膀胱壓力在各時間點較正常組顯著降低并隨病程逐漸降低;膀胱順應(yīng)性在各時間點較正常組增加;膀胱濕重及殘尿量在各時間點均較正常組明顯增加并呈隨病程遞增趨勢。(2)糖尿病組光鏡下表現(xiàn):粘膜下層有明顯的嗜酸細胞浸潤,固有膜充血水腫。逼尿肌肌細胞肥大,平滑肌層厚度可達正常組2-3倍,形態(tài)多樣,排列紊亂松散,可見肌束斷裂。(3)電鏡
5、下表現(xiàn):平滑肌細胞內(nèi)線粒體呈現(xiàn)不同程度的腫脹,基質(zhì)密度降低,線粒體嵴斷裂、變短、稀疏、消失,部分線粒體甚至可呈基質(zhì)空化并隨病程加長而加重。(4)Western-blot與RT-PCR結(jié)果均發(fā)現(xiàn)膀胱NGF蛋白量與NGF mRNA產(chǎn)物含量明顯降低并隨病程延長逐漸下降。
結(jié)論:糖尿病大鼠早期即可出現(xiàn)膀胱收縮力下降及逼尿肌形態(tài)學(xué)改變,表現(xiàn)出早期糖尿病存在逼尿肌損害。NGF在糖尿病大鼠膀胱中表現(xiàn)出隨病程延長逐漸下降的趨勢,與糖尿病膀胱病
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