鷹嘴豆金屬硫蛋白對鉛細(xì)胞毒性的干預(yù)研究.pdf

1、目的：探討一種從新疆地產(chǎn)藥食兼用植物鷹嘴豆中提取純化金屬硫蛋白用于鉛防治的方法，并進(jìn)一步觀察不同濃度外源性植物金屬硫蛋白對鉛染毒淋巴細(xì)胞和海馬神經(jīng)元細(xì)胞作用不同時間的拮抗效應(yīng)，為預(yù)防和治療鉛中毒提供理論依據(jù)。
　　方法：采用紫外掃描對鷹嘴豆金屬硫蛋白提取液進(jìn)行定性鑒定，使用鎘-血紅蛋白飽和法以及火焰原子吸收（AAS）法對鷹嘴豆中金屬硫蛋白的含量進(jìn)行測定，采用凝膠過濾層析技術(shù)初步純化鷹嘴豆中的金屬硫蛋白。將純化的鷹嘴豆-金屬硫蛋白配

2、制成不同濃度溶液對染毒鉛的Wistar大鼠淋巴細(xì)胞和海馬神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行體外干預(yù)實(shí)驗(yàn)，觀察外源性鷹嘴豆金屬硫蛋白拮抗鉛毒性的效果。實(shí)驗(yàn)中用50μmol/L的醋酸鉛對淋巴細(xì)胞和海馬神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行染毒，將金屬硫蛋白分成三個濃度組：高劑量組100μmol/L、中劑量組1μmol/L、低劑量組0.01μmol/L進(jìn)行干預(yù)，同時設(shè)陰性對照與陽性對照組，陰性對照組細(xì)胞不做任何處理，陽性對照組細(xì)胞只染毒鉛。采用MTT法測定不同作用時間（24h、48h、

3、72h）各組淋巴細(xì)胞和海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率；通過流式細(xì)胞技術(shù)觀察細(xì)胞凋亡情況；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測細(xì)胞外液中乳酸脫氫酶（LDH）活性、金屬硫蛋白及總蛋白含量；并用原子吸收光譜法測定細(xì)胞中鉀離子及鉛離子含量。
　　結(jié)果：1）鷹嘴豆中金屬硫蛋白含量為0.16mg/g；鎘-金屬硫蛋白在255nm處有一吸收峰；純化的金屬硫蛋白含量達(dá)91.30％。2）與醋酸鉛染毒組相比72h金屬硫蛋白高劑量干預(yù)組細(xì)胞存活率增高（P<0.05）；金屬硫蛋白

4、24h高劑量干預(yù)組，48h中、高劑量干預(yù)組與72h各劑量干預(yù)組海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率較醋酸鉛染毒組增高（P<0.05），不同劑量金屬硫蛋白干預(yù)24h后，海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率均有所下降。3）與醋酸鉛染毒組相比，高、中劑量金屬硫蛋白作用72h后，淋巴細(xì)胞上清液中LDH活性降低（P<0.05），金屬硫蛋白24h中劑量干預(yù)組、48h高劑量與中劑量干預(yù)組、72h各劑量干預(yù)組鉀離子含量降低（P<0.05）；與醋酸鉛染毒組相比，海馬神經(jīng)元細(xì)胞金屬硫蛋白

5、24h各劑量干預(yù)組、48h與72h中、高干預(yù)組細(xì)胞上清液中LDH活性降低（P<0.05），金屬硫蛋白干預(yù)24h高、中劑量組，48h與72h各劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞鉀離子含量降低（P<0.05）。4）與醋酸鉛染毒組相比，淋巴細(xì)胞金屬硫蛋白干預(yù)各劑量組不同時間金屬硫蛋白含量均增加（P<0.05），金屬硫蛋白24h、48h高、中劑量干預(yù)組和72h高劑量干預(yù)組淋巴細(xì)胞總蛋白含量升高（P<0.05）；金屬硫蛋白干預(yù)各劑量組不同時間海馬神經(jīng)元細(xì)胞金屬

6、硫蛋白含量均增加（P<0.05），與醋酸鉛染毒組相比，金屬硫蛋白干預(yù)24h各劑量組、48h中、高劑量組與72h中、高劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞總蛋白含量升高（P<0.05）。5）與醋酸鉛染毒組相比，金屬硫蛋白干預(yù)24h高、中組，48h與72h各劑量組淋巴細(xì)胞中鉛離子含量降低（P<0.05）；金屬硫蛋白干預(yù)24h高劑量組、48h與72h各劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞鉛離子含量降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：一定劑量范圍內(nèi)金屬硫蛋白可促進(jìn)淋巴細(xì)胞