當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物聯(lián)合直線加速器照射抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞實驗研究.pdf

1、目的：通過醫(yī)用直線加速器產(chǎn)生的X射線一次性照射體外培養(yǎng)的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，構(gòu)建輻射模型。探討當(dāng)歸紅芪超濾物對于直線加速器輻射前后人肝癌SMMC-7721細(xì)胞及其Caspase-3蛋白酶表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討二者聯(lián)合誘導(dǎo)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞凋亡，為應(yīng)用當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物輔助臨床放療增敏治療腫瘤提供實驗依據(jù)。
　　方法：取密度為1×105個/mL人肝癌SMMC-7721細(xì)胞用于實驗。實驗分為10組，其中1個對照組

2、（Z）即正常對照組，1個純輻射組（R）給以源皮距100cm4Gy的X射線，另設(shè)4個純藥物組，分別設(shè)A、B、C、D四個藥物濃度梯度為：2mg/ml、4mg/ml、6mg/ml、8mg/ml。依據(jù)藥物濃度梯度由低到高，分別設(shè)4個輻射加藥組為：E、F、G、H，同樣給以源皮距100cm4Gy的X射線。光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；利用電子透鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；采用MTT法檢測細(xì)胞生長抑制率；用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化；并通過Caspase-3酶活

3、性檢測試劑盒，采用分光光度法檢測細(xì)胞裂解液中Caspase-3酶活性。
　　結(jié)果：倒置顯微鏡觀察，正常組細(xì)胞形態(tài)呈多邊形，生長密集，呈魚鱗狀排列，胞質(zhì)透明，核仁清晰規(guī)則，細(xì)胞膜完整光滑；單純輻射組外形并無明顯改變，但密度明顯下降；輻射加藥 G組（6mg/ml）細(xì)胞變化最為明顯細(xì)胞體積明顯縮小，呈圓形，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞輪廓不清。透射電鏡觀察，正常組細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，核染色質(zhì)分布均勻，核仁清晰，細(xì)胞膜完整；單純輻射組細(xì)胞形態(tài)基本完整

4、，細(xì)胞核濃縮，出現(xiàn)核邊集現(xiàn)象，細(xì)胞膜皺縮粗糙不光滑，出現(xiàn)少量空泡，細(xì)胞凋亡特征明顯；輻射加藥 G組（6mg/ml）細(xì)胞凋亡特征更為明顯，核濃縮變形，邊集明顯，核膜皺褶，細(xì)胞線粒體進(jìn)一步腫大空化，空泡變性加重，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張空化甚而崩解，有細(xì)胞自噬現(xiàn)象發(fā)生，細(xì)胞形態(tài)改變明顯，細(xì)胞膜變形明顯，不完整；MTT法檢測結(jié)果：經(jīng)當(dāng)歸紅芪超濾物作用后的肝癌細(xì)胞其OD值降低并呈時間依賴關(guān)系（P<0.05）。提示其對于人肝癌SMMC-7721細(xì)胞具有抑制增殖

5、作用。輻射加藥組細(xì)胞的OD值較單純輻射組明顯降低（P<0.05），表明輻射聯(lián)合藥物能進(jìn)一步抑制細(xì)胞的活性，起到誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，尤其是輻射加藥G組對于人肝癌SMMC-7721細(xì)胞具有抑制增殖作用更為明顯（P<0.01），具有較好的輻射增敏作用。流式結(jié)果顯示：4Gy X射線輻射后24h可使肝癌細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞數(shù)量明顯增多，由44.8％升至71.8％（P<0.01），藥物組也可以使G0/G1期細(xì)胞比例有所升高（P<0.05），輻射加藥

6、G組細(xì)胞G0/G1期比例為87.9％阻滯最為明顯（P<0.01）。Caspase-3酶活性檢測結(jié)果顯示：輻射加藥物 G組（6mg/ml）細(xì)胞Caspase-3酶活性較純輻射組細(xì)胞明顯增強(qiáng)（P<0.01）。
　　結(jié)論：當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物物（10萬分子量）對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞具有抑制生長作用，聯(lián)合直線加速器照射對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞有一定的誘導(dǎo)凋亡作用。并可以作為輻射增敏劑一定程度上提高腫瘤細(xì)胞對于X射線的敏感性。