血管性血友病因子檢測(cè)候選參考物質(zhì)的研制及一致化相關(guān)問題研究.pdf

1、目的:血管性血友病因子(von Willebrand Factor，vWF)檢測(cè)主要應(yīng)用于血管性血友病的診斷及分型，也可用于血友病的輔助診斷，但目前vWF檢測(cè)沒有國(guó)際公認(rèn)的參考方法，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品不易獲得，不同檢測(cè)系統(tǒng)間結(jié)果的可比性較差，難以滿足臨床需要。為便于臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)施質(zhì)量改進(jìn)，促進(jìn)血管性血友病因子檢測(cè)的一致化，本研究通過問卷調(diào)查對(duì)國(guó)內(nèi)vWF檢測(cè)現(xiàn)狀及存在的問題進(jìn)行分析;制備了vWF檢測(cè)候選參考物質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行均一性、穩(wěn)定性、互通性評(píng)價(jià)

2、、定值和室內(nèi)質(zhì)控試應(yīng)用;對(duì)vWF抗原檢測(cè)一致化相關(guān)問題（如性能驗(yàn)證、校準(zhǔn)等）進(jìn)行了探討。
　　方法:
　　1.vWF檢測(cè)現(xiàn)狀的調(diào)查研究:通過設(shè)計(jì)、發(fā)放調(diào)查問卷，收集國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室開展vWF檢測(cè)項(xiàng)目的相關(guān)檢測(cè)信息，包括實(shí)驗(yàn)室基本信息、儀器試劑使用信息、質(zhì)量控制情況以及參考區(qū)間使用情況等;將對(duì)國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室vWF檢測(cè)的情況與國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)的要求進(jìn)行比較分析，針對(duì)性的提出改進(jìn)措施。
　　2.vWF檢測(cè)候選參考物質(zhì)的研制與評(píng)價(jià):對(duì)不同制

3、備方法的關(guān)鍵影響因素進(jìn)行研究和分析，確定最佳的制備方案。依據(jù)ISO Guide35《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品的定值——通用原則和統(tǒng)計(jì)原理》和CNAS-GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》的要求，對(duì)候選參考物質(zhì)的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。依據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T356-2011《基質(zhì)效應(yīng)與互通性評(píng)估指南》對(duì)參考物質(zhì)在兩種主流檢測(cè)系統(tǒng)(STAGO和IL檢測(cè)系統(tǒng))的互通性進(jìn)行評(píng)價(jià);依據(jù)ISO Guide35的要求，以NIBSC凝血標(biāo)準(zhǔn)品為溯源標(biāo)

4、準(zhǔn)，采用多家實(shí)驗(yàn)室協(xié)作定值。將參考物質(zhì)試應(yīng)用于室內(nèi)質(zhì)控，同時(shí)檢測(cè)商品質(zhì)控物作為對(duì)比。
　　3.vWF抗原檢測(cè)結(jié)果一致化相關(guān)問題研究:對(duì)vWF抗原定量檢測(cè)系統(tǒng)的正確度、批內(nèi)不精密度、日間精密度、攜帶污染率和線性進(jìn)行了性能驗(yàn)證評(píng)價(jià)。采用新鮮臨床樣本對(duì)兩個(gè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行可比性評(píng)價(jià)，并探討使用NIBSC凝血標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行模擬定標(biāo)，評(píng)價(jià)定標(biāo)效果。
　　結(jié)果:
　　1.檢測(cè)現(xiàn)狀的調(diào)查研究:問卷調(diào)查顯示，65.5％的實(shí)驗(yàn)

5、室檢測(cè)標(biāo)本量較少(＜50個(gè)/月)，20.7％的實(shí)驗(yàn)室未開展室內(nèi)質(zhì)控，16.7％～20.0％的實(shí)驗(yàn)室僅進(jìn)行正常水平的室內(nèi)質(zhì)控，44.8％的實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢測(cè)儀器進(jìn)行了性能驗(yàn)證。各實(shí)驗(yàn)室所用參考區(qū)間的上限范圍在122％～176％，下限范圍在40.6％～75％。僅2家實(shí)驗(yàn)室對(duì)參考區(qū)間按血型分類進(jìn)行了設(shè)定。大部分實(shí)驗(yàn)室直接使用廠家提供的參考區(qū)間。
　　2.候選參考物質(zhì)的研制與評(píng)價(jià):選取人新鮮冰凍血漿為原料，采用低溫沉淀方法分離提取vWF，將低溫

6、沉淀獲得的上清液與正常原料血漿按一定比例混合并調(diào)整濃度水平，然后分裝成1mL/支，置于低溫冷凍（-80℃）條件下保存。本研究共制備兩批次候選參考物質(zhì)（第一批制備物批號(hào)分別為vWF201401、vWF201402和vWF201403，vWF∶Ag濃度范圍37.0％～83.5％;第二批制備物批號(hào)分別為vWF201501、vWF201502、vWF201503、vWF201504和vWF201505, vWF∶Ag濃度范圍14.0％～133.

7、5％，vWF∶A范圍6.3％～118.3％）。候選參考物質(zhì)vWF∶Ag檢測(cè)已完成均勻性、穩(wěn)定性、互通性評(píng)價(jià)、室內(nèi)質(zhì)量控制試應(yīng)用和定值，參考物質(zhì)的vWF∶A檢測(cè)已完成均勻性評(píng)價(jià)，長(zhǎng)期穩(wěn)定性已觀察16周。候選參考物質(zhì)vWF∶Ag、 vWF∶A均勻性良好，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。第一批候選參考物質(zhì)的長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)價(jià)顯示vWF∶Ag濃度在44周內(nèi)無(wú)明顯趨勢(shì)性變化(P＞0.05)，長(zhǎng)期穩(wěn)定性不確定度ults為0.79％～1.20％。第二批

8、候選參考物質(zhì)（vWF∶Ag、 vWF∶A）的長(zhǎng)期穩(wěn)定性將繼續(xù)觀察。候選參考物質(zhì)vWF∶Ag檢測(cè)在STAGO和IL兩種檢測(cè)系統(tǒng)間互通性良好。第二批候選參考物質(zhì)各批號(hào)vWF∶Ag定值結(jié)果為12.2％～138.9％，定值引入不確定度uchar為0.06％～0.09％。參考物質(zhì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc為1.05％～2.17％，擴(kuò)展不確定度U(k=2)為2.1％～4.4％。室內(nèi)質(zhì)控試應(yīng)用結(jié)果顯示，候選參考物質(zhì)vWF∶ Ag檢測(cè)結(jié)果的日間不精密度CV為

9、1.3％～2.3％，進(jìn)口商品質(zhì)控物vWF∶Ag檢測(cè)結(jié)果的日間不精密度CV為1.2％～2.6％。
　　3.一致化相關(guān)問題研究:性能驗(yàn)證結(jié)果顯示，正確度驗(yàn)證偏差范圍為-0.99％～3.96％，批內(nèi)精密度CV范圍1.1％～1.8％，日間精密度2.9％～3.6％，攜帶污染率為0.0％，線性驗(yàn)證斜率為1.003，相關(guān)系數(shù)為1.000，各稀釋度的實(shí)測(cè)值與理論值的百分偏差均在10％以內(nèi)。兩系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果相關(guān)系數(shù)為0.953，相關(guān)性較好，偏差分布范

10、圍為-20.8％～23.7％。采用凝血標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)兩種檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行模擬校準(zhǔn)，校準(zhǔn)前相對(duì)偏差范圍-20.8％～23.7％，校準(zhǔn)后相對(duì)偏差范圍為-9.7％～13.3％;校準(zhǔn)前絕對(duì)偏差范圍-30.5％～20.9％，校準(zhǔn)后絕對(duì)偏差范圍-26.7％～24.3％。
　　結(jié)論:
　　1.問卷調(diào)查顯示vWF檢測(cè)存在的主要問題是缺乏vWF相關(guān)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)/指南，臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的質(zhì)量控制不規(guī)范。
　　2.本研究明確了vWF檢測(cè)候選參考物質(zhì)的最佳