花蕊石抗肝癌活性組分篩選及物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：
　　 花蕊石為國家課題“重大新藥創(chuàng)制-中藥組分配伍治療肝癌的新藥研究”所選臨床經(jīng)驗(yàn)復(fù)方中主要藥味，本文以中藥花蕊石為研究對(duì)象，采用現(xiàn)代分析技術(shù)結(jié)合體內(nèi)外藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，對(duì)中藥花蕊石進(jìn)行抗腫瘤活性組分篩選并對(duì)其物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究，明確了花蕊石化學(xué)組分抗肝癌的藥理作用，為研究開發(fā)新的抗肝癌活性藥物提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 采用傅里葉紅外吸收光譜法、X射線粉晶衍射法等測試手段，對(duì)花蕊石及其組分礦物質(zhì)

2、蛇紋石、方解石進(jìn)行礦物種屬、結(jié)構(gòu)的鑒別，并對(duì)炮制前后的礦質(zhì)物相變化進(jìn)行研究。
　　 本文對(duì)花蕊石抗腫瘤活性組分進(jìn)行了兩個(gè)層次的篩選研究?？鼓[瘤活性一級(jí)篩選以花蕊石生品、花蕊石制品水煎液為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以荷瘤小鼠（肝癌H22小鼠）為在體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，以肝癌Hep G2，SMMC-7721細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)癌株，應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞的增殖活性，比較花蕊石生、制品水煎液對(duì)腫瘤的抑制作用。二級(jí)篩選以花蕊石次級(jí)組分方解石、蛇紋石制品水煎液為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，同

3、法比較二者對(duì)腫瘤的抑制作用，并通過體外血清藥理學(xué)及體內(nèi)抗肝癌藥效實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)了花蕊石藥效物質(zhì)組分的抗肝癌活性。
　　 采用ICP-MS法對(duì)花蕊石炮制前后元素含量及元素溶出量變化、制品水煎液中元素形態(tài)及元素含量的變化進(jìn)行研究，分析生、制品花蕊石結(jié)構(gòu)及元素分布差異，對(duì)花蕊石抗腫瘤活性物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行初步研究。采用ICP-MS法觀測小鼠血清中微量元素變化，初步探討花蕊石藥效物質(zhì)組分與生物效應(yīng)之間的相互關(guān)系。
　　 結(jié)果及結(jié)論：

4、>　　 1.采用綜合鑒別的方法鑒定中藥花蕊石
　　 經(jīng)鑒定，本實(shí)驗(yàn)選用花蕊石礦石樣品為正品花蕊石（英文名：Ophicalcitum），礦物組分為方解石（化學(xué)式：CaCO3，英文名：Calcite）及蛇紋石族礦物利蛇紋石（理想化學(xué)式：Mg3[Si2O5]（OH）4，英文名：Serpentine-Lizardite）。
　　 2.首次明確花蕊石制品水煎液抗腫瘤活性強(qiáng)于生品水煎液，首次明確花蕊石抗腫瘤活性物質(zhì)主要來源于其組分

5、蛇紋石。
　　 一級(jí)篩選結(jié)果表明，制品水煎液的抗腫瘤活性明顯強(qiáng)于生品水煎液（體外對(duì)Hep G2細(xì)胞的IC50花蕊石制品69.05mg/mL26.79％，
　　 二級(jí)篩選結(jié)果表明蛇紋石制品水煎液的抑瘤作用明顯強(qiáng)于方解石制品水煎液（體外對(duì)Hep G2細(xì)胞的IC50蛇紋石制品0.59mg/mL

6、19.43％）。
　　 3.首次驗(yàn)證了花蕊石抗腫瘤的藥理作用
　　 體內(nèi)外藥效實(shí)驗(yàn)及血清藥理實(shí)驗(yàn)表明，制品花蕊石及其蛇紋石組分水煎液抗肝癌作用藥效明顯。發(fā)現(xiàn)花蕊石中方解石與蛇紋石可能具有協(xié)同作用?；ㄈ锸破?、蛇紋石制品水煎液含藥血清在體外對(duì)Hep G2的抑制率分別為38.2％，32.8％；對(duì)SMMC-7721的抑制率分別為41.5％，39.3％?；ㄈ锸破匪逡?個(gè)劑量組對(duì)H22小鼠肝癌實(shí)體瘤抑瘤率分別為51.3％，65

7、.3％，44.0％。
　　 4.明確了花蕊石炮制后礦質(zhì)物相及元素形態(tài)變化
　　 利蛇紋石（Mg3[Si2O5]（OH）4）轉(zhuǎn)變?yōu)殒V橄欖石（Mg2SiO4），方解石（CaCO3）部分發(fā)生分解，生成CaO。Se含量變化率最高（增加55.95％），且浸留比最大，Se為花蕊石作用最大元素及最特征的元素。
　　 5.首次對(duì)花蕊石抗肝癌微量元素進(jìn)行研究
　　 表明中藥花蕊石對(duì)肝癌的治療作用與微量元素有關(guān)。Cu元素為區(qū)