單純皰疹病毒1型致小鼠面神經(jīng)麻痹及病毒性動(dòng)物模型中面神經(jīng)元凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、Bell'sPalsy(BP)是最常見(jiàn)的顱神經(jīng)疾病，占周圍性面神經(jīng)麻痹疾病的60％～75％，由于病因不明，又稱特發(fā)性面癱。病因假說(shuō)之病毒感染學(xué)說(shuō)認(rèn)為BP是潛伏于膝狀神經(jīng)節(jié)的單純皰疹病毒1型(herpessimplexvirustype1，HSV-1)復(fù)活造成的神經(jīng)炎性改變，目前多項(xiàng)研究證實(shí)HSV-1與BP關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)采用了一種新的病毒接種方法，建立了臨床表現(xiàn)和病理改變均類似于BP的動(dòng)物模型，并進(jìn)一步研究該動(dòng)物模型中面神經(jīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的

2、生存狀態(tài)，以期對(duì)BP的臨床和預(yù)后特點(diǎn)作出解釋。 目的1.選擇理想的方法，建立HSV-1感染造成的面神經(jīng)麻痹動(dòng)物模型，并研究HSV-1與BP的關(guān)系。 2.研究該動(dòng)物模型中面神經(jīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的凋亡情況以及凋亡相關(guān)基因Bcl-2和Bax在神經(jīng)元的表達(dá)水平，推斷BP中面神經(jīng)元的生存狀態(tài)，對(duì)BP的臨床和預(yù)后特點(diǎn)作出相關(guān)解釋。 方法1.(第一部分)Balb/c小鼠66只，切斷雙側(cè)面神經(jīng)耳后支，右側(cè)神經(jīng)斷端接種25uLHSV-1

3、，左側(cè)接種等量胎牛血清作為對(duì)照。觀察小鼠全身情況、雙側(cè)面肌運(yùn)動(dòng)的對(duì)稱性；顳骨連續(xù)切片HE染色；顳外段面神經(jīng)鋨酸染色；雙側(cè)面神經(jīng)、腦干、三叉神經(jīng)節(jié)、脊髓行PCR檢測(cè)HSVDNA片斷。 2.(第二部分)Balb/c小鼠120只，分為4組：A組，切斷右側(cè)面神經(jīng)耳后支，于神經(jīng)斷端接種25uLHSV-1；B組，右側(cè)耳廓背面皮膚劃痕接種25uLHSV-1；C組，右側(cè)耳廓背面皮下注射25uLHSV-1；D組，右側(cè)耳后皮下注射100uLHSV-

4、1。左側(cè)接種等量胎牛血清作為對(duì)照。觀察小鼠面癱和全身情況，比較各組間面癱發(fā)生率和動(dòng)物死亡率。 3.(第三部分)Balb/c小鼠84只，分為2組：病毒接種組和神經(jīng)切斷組。分別在操作后1、3、7、10、15、20、30天分批處死動(dòng)物，對(duì)面神經(jīng)核進(jìn)行HE染色、尼氏染色，采用原位凋亡細(xì)胞檢測(cè)法(TUNEL)檢測(cè)面神經(jīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的凋亡，免疫組化染色檢測(cè)Bcl-2和Bax兩種凋亡相關(guān)基因在面神經(jīng)元內(nèi)的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果1.(第一部

5、分)28只小鼠(42.42％)在接種后發(fā)生同側(cè)可逆性面癱。顳骨連續(xù)切片發(fā)現(xiàn)面癱鼠右側(cè)面神經(jīng)腫脹、神經(jīng)周圍間隙變小、炎細(xì)胞浸潤(rùn)，面神經(jīng)橫截面積/面神經(jīng)管橫截面積比值增大；面神經(jīng)出現(xiàn)髓鞘變薄、脫失。面癱鼠和無(wú)面癱鼠的部分神經(jīng)組織中檢測(cè)到HSVDNA。 2.(第二部分)A組13只發(fā)生同側(cè)可逆性面癱(43.33％)，死亡0只；B組6只發(fā)生同側(cè)可逆性面癱(20％)，死亡0只；C組沒(méi)有動(dòng)物出現(xiàn)面癱或死亡；D組1只出現(xiàn)同側(cè)面癱(3.33％)，

6、死亡12只(40％)。 3.(第三部分)面神經(jīng)切斷后，同側(cè)面神經(jīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元出現(xiàn)尼氏體變性，凋亡細(xì)胞數(shù)量增加，在第10、15天達(dá)高峰，Bcl-2表達(dá)降低，Bax表達(dá)升高，Bcl-2/Bax比值下降；接種病毒后，同側(cè)面神經(jīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元沒(méi)有發(fā)生細(xì)胞凋亡，Bcl-2表達(dá)增高，在第15天達(dá)高峰，Bcl-2/Bax比值上升。 結(jié)論1.經(jīng)面神經(jīng)耳后支斷端接種HSV-1可以造成小鼠暫時(shí)性面癱，是由于病毒逆行轉(zhuǎn)運(yùn)引起面神經(jīng)炎，神經(jīng)腫脹、受壓