味噌抗HBV活性成分研究.pdf

1、乙型肝炎病毒是一種嗜肝病毒，主要存在于肝細胞內(nèi)并損害肝細胞，引起肝細胞炎癥、壞死、纖維化，給人類的健康造成巨大威脅。目前臨床抗HBV藥物主要為核苷類藥物，此類藥物能有效地抑制病毒復制，但不能徹底清除病毒，而且停藥后易復發(fā)，容易導致耐藥性等問題。從天然產(chǎn)物中尋找具有抗HBV活性的先導化合物，對開發(fā)新型抗HBV藥物具有重要意義。
　　前期研究發(fā)現(xiàn)味噌具有較好的抗HBV活性，進一步研究發(fā)現(xiàn)其活性部位為正丁醇萃取部位。在HepG2.2.1

2、5細胞模型體外抗HBV活性篩選的指導下，對味噌抗HBV活性部位開展系統(tǒng)的化學成分研究，評價了分離得到的單體化合物的體外抗HBV活性，初步分析了異黃酮類活性化合物的構(gòu)效關(guān)系。
　　味噌（みそ，miso）是日本的一種傳統(tǒng)大豆發(fā)酵產(chǎn)品，與中國的豆瓣醬、豆豉，日本的納豆，韓國的chungkookjang、doenjang等相似，在亞洲國家作為調(diào)味品食用具有悠久的歷史。
　　本課題通過硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜、C

3、18反相柱色譜和PHPLC等手段對味噌抗HBV活性部位進行分離純化，從中分離得到33個化合物，通過ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、HMBC等波譜分析，鑒定了其中27個化合物，分別為:環(huán)-（脯氨酸-甘氨酸）(FSE-1)、環(huán)-（苯丙氨酸-酪氨酸）(FSE-2)、環(huán)-（亮氨酸-酪氨酸）（FSE-3）、4'，7，8-三羥基-6-甲氧基異黃酮(FSE-4)、4'，5，7，8-四羥基異黃酮（FSE-5）、4'，7，8-三羥基異黃酮(F

4、SE-6)、黃豆黃素（FSE-7）、染料木素(FSE-8)、大豆素(FSE-9)、異亮氨酸(FSE-10)、纈氨酸(FSE-11)、亮氨酸(FSE-12)、焦谷氨酸甲酯(FSE-13)、酪氨酸(FSE-14)、N-甲基亮氨酸(FSE-15)、苯丙氨酸(FSE-16)、苯丙氨酸甲酯（FSE-17）、N-乙酰苯丙氨酸（FSE-18）、谷氨酸(FSE-19)、甘氨酸(FSE-20)、天冬氨酸(FSE-21)、尿嘧啶（FSE-22）、胸腺嘧啶(

5、FSE-23)、山崳酸(FSE-24)、棕櫚酸（FSE-25）、鄰苯二酚(FSE-26)和胡蘿卜苷(FSE-27)。單體化合物涉及3個環(huán)肽類、6個異黃酮類、12個氨基酸類、以及6個其他類化合物，其中24個化合物為首次從味噌中分離得到，18個化合物為發(fā)酵作用下新生成的二次成分。
　　采用HepG2.2.15細胞模型對分離得到的27個單體化合物進行體外抗HBV活性評價，首次發(fā)現(xiàn)了5個具有一定抗HBV活性的化合物（FSE-5、FSE-6

6、、FSE-13、FSE-19和FSE-23）?；衔颋SE-13對HepG2.2.15細胞表面抗原和e抗原分泌均具有抑制作用，最大抑制率為22.9％和42.7％（500.0μg/mL，3.50μM）;化合物FSE-19特異性地抑制e抗原的分泌，最大抑制率為37.6％(500μg/mL，3.40μM);化合物FSE-23對表面抗原和e抗原分泌均具有抑制作用，最大抑制率為50.2％和41.3％（250μg/mL，1.98μM）;化合物FSE

7、-5和FSE-6對表面抗原和e抗原分泌具有抑制作用，最大抑制率分別為19.9％和17.1％(100μg/mL,0.35μM),15.4％和24.6％(5μg/mL,18.5nM)。
　　初步分析了活性異黃酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系:異黃酮母核無6位甲氧基取代對化合物的抗HBV活性具有一定作用，表現(xiàn)為FSE-6＞ FSE-4;8位羥基取代可能有助于提高異黃酮化合物的抗HBV活性，表現(xiàn)為FSE-5＞FSE-8，F(xiàn)SE-6＞FSE-9。