田基黃抗缺氧活性成分的研究.pdf

1、本課題組通過對(duì)采自云南、廣西和四川等地區(qū)的1000多種中藥及藥用植物提取物進(jìn)行了抗缺氧活性測試，從中篩選出4種在體內(nèi)體外均具有較強(qiáng)抗缺氧活性的植物。本文對(duì)其中一種植物田基黃(Hypericumjaponicum Thunb．Ex Murray)進(jìn)行了抗神經(jīng)細(xì)胞缺氧活性成分的追蹤研究。田基黃為藤黃科金絲桃屬植物地耳草(Hypericumjaponicum Thunb．Ex Murray)的全草，又名地耳草，產(chǎn)于廣東、廣西、四川、湖南、福建

2、、江西等地。用于治療傳染性肝炎、瀉痢、小兒驚風(fēng)、疳積、腸癰、蛇咬傷等疾病。 本研究采用密閉小鼠缺氧損傷體內(nèi)模型和PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤克隆化細(xì)胞株)缺氧損傷體外模型對(duì)田基黃(HypericumjaponicumThunb．exMurray)60％乙醇提取物及該提取物的氯仿萃取部分、乙酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分和剩余水層進(jìn)行了抗缺氧活性測試，確定抗缺氧的活性部位為乙酸乙酯萃取部分。 利用硅膠柱色譜、ODS柱

3、色譜、SephadexLH-20柱色譜及制備HPLC等多種色譜分離手段，對(duì)田基黃(HypericumjaponicumThunb．exMurray)60％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離，得到34個(gè)化合物。利用顯色反應(yīng)和光譜學(xué)(UV、IR、MS和NMR)的方法對(duì)其中31個(gè)化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，分別為：豆甾醇(stigmasterol)(1)、β-胡蘿卜苷(daucosterin)(2)、bijaponicaxanthone(

4、3)、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷(quercetin-7-O-α-L-rahmnoside)(4)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(quercetin-3-O-α-L-rahmnoside)(5)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucoside)(6)、4，6-dimethyl，1-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl]multi

5、fidol(7)*、原兒茶酸(protocatechuicacid)(8)、沒食子酸(gallicacid)(9)、槲皮素(quercetin)(10)、山柰酚(kaempferol)(11)、3-O-甲基槲皮素(3-O-methylquercetin)(12)、木樨草素-7-O-蕓香糖苷(luteolin-7-O-rutinoside)(13)、芹菜素(apigenin)(14)、5，7，4’-三羥基-3’-甲氧基黃酮(5，7，4’-

6、trihydroxy-3’-methoxyflavone)(15)、3’，4’-二甲氧基-5，7-二羥基黃酮(3’，4’-dimethoxy-5，7-dihydroxyflavone)(16)、對(duì)羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoicacid)(17)、(2E)-二氫山柰酚((2E)-dihydrokaempferol)(18)、(2E)-二氫槲皮素((2E)-dihydroquercetin)(19)、5，7，3’，4’-四羥基

7、二氫黃酮(5，7，3’，4’-tetrahydroxyflavanone)(20)、反式對(duì)羥基桂皮酸(p-hydroxycinnamicacid)(21)、5，4’-二羥基-7-甲氧基二氫黃酮(5，4’-dihydroxy-7-methoxyflavanone)(22)、(2E)-3，5，3’，4’-四羥基-7-甲氧基二氫黃酮((2E)-3，5，3’，4’-tetrahydroxy-7-methoxyflavanone)(23)、(22

8、)-二氫槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷((22)-dihydroquercetin-3-O-α-L-rahmnoside)(24)、綠原酸(chlorogenicacid)(25)、4-O-β-D-葡萄糖香豆酸(4-O-β-D-glucosylcoumancacid)(26)、1，5-二羥基-8-甲氧基雙苯吡酮(1，5-dihydroxy-8-methoxyxanthone)(27)、1，7-二羥基-4-甲氧基雙苯吡酮(1，7-dih

9、ydroxy-4-methoxyxanthone)(28)、3，7-二羥基-1，2-二甲氧基雙苯吡酮(3，7-dihydroxy-1，2-dihymethoxyxanthone)(29)、3，6-二羥基-1，2，7-三甲氧基雙苯吡酮(3，6-dihydroxy-1，2，7-trihymethoxyxanthone)(30)、1，4，7-三羥基-3-甲氧基雙苯吡酮(1，4，7-trihydroxy-3-hymethoxyxanthone)

10、(31)。其中二氫黃酮類化合物6個(gè)：化合物18、19、20、22、23、24；黃酮類化合物10個(gè)：化合物4、5、6、10、11、12、13、14、15、16；雙苯吡酮類化合物6個(gè)：化合物3、27、28、29、30、31；酚酸類化合物7個(gè)：化合物7、8、9、17、21、25、26；其他化合物2個(gè)：化合物1、2；化合物7為新化合物；化合物8、12、18、19、24、25、29、30為首次從該植物中分離得到。 采用PC12細(xì)胞缺氧損傷

11、作用的體外活性測試方法對(duì)田基黃分離得到的部分單體進(jìn)行抗缺氧活性測試。研究發(fā)現(xiàn)，化合物4、5、8、9、10、12、15顯示了較好的活性，其中化合物4、5、10、12和15為黃酮類化合物；化合物8和9為酚酸類化合物。 采用DPPH法對(duì)田基黃分離得到的部分單體化合物進(jìn)行DPPH自由基清除能力的考察。結(jié)果顯示，化合物8、10、18、19、25顯示出和Vc基本相當(dāng)?shù)幕钚裕渲谢衔?和25為酚酸類化合物；化合物10為黃酮類化合物；化合物1