人參皂苷Rg3及其與奧沙利鉑和索拉非尼聯(lián)合誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察人參皂苷Rg3及其與奧沙利鉑和索拉非尼聯(lián)合對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡的影響，并探討相關(guān)機(jī)制，為中藥與化療藥物及分子靶向藥物的聯(lián)合應(yīng)用提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：選擇合適的人參皂苷Rg3、奧沙利鉑和索拉非尼單藥濃度，將單藥、兩藥聯(lián)合及三藥聯(lián)合分別作用于人肝癌細(xì)胞SMMC-7721，采用多種實(shí)驗(yàn)方法觀察其對(duì)細(xì)胞株的影響：(1)采用MTT法觀察對(duì)SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響；(2)流式細(xì)胞術(shù)

2、觀察SMMC-7721細(xì)胞早期凋亡情況；(3)原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)SMMC-7721細(xì)胞的中晚期凋亡情況；(4)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-qPCR)、免疫印跡法(Westernblotting)檢測(cè)Bax、Bcl-2表達(dá)情況；(5)采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)Bax、Bcl-2、Caspase-3的蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：(1)人參皂苷Rg3、奧沙利鉑和索拉非尼單藥或聯(lián)合均具有抑制增殖作用，其中三藥對(duì)比兩藥、兩藥

3、對(duì)比單藥作用更明顯(P＜0.01)，藥物之間聯(lián)合表現(xiàn)出良好的相加作用；(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，各實(shí)驗(yàn)組均具有誘導(dǎo)凋亡的作用，三藥組比兩藥組、兩藥組比單藥組具有顯著誘導(dǎo)凋亡作用(P＜0.01)；(3)原位末端標(biāo)記法顯示，陰性對(duì)照組細(xì)胞幾乎無(wú)凋亡，細(xì)胞核著淡紫色，陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞核幾乎全著深褐色，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核固縮著深褐色，單藥及聯(lián)合用藥后凋亡指數(shù)顯著升高（P＜0.01）；(4)RT-qPCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：除人參皂苷Rg3+索拉非尼兩藥組與人參

4、皂苷Rg3單藥組Bax基因表達(dá)無(wú)差異外，其余各實(shí)驗(yàn)組Bax基因表達(dá)均增強(qiáng)，且兩藥組較單藥組、三藥組較兩藥組Bax基因表達(dá)均明顯增強(qiáng)(P＜0.01或P＜0.05);Bcl-2表達(dá)在單藥組、兩藥組及三藥組中具有降低趨勢(shì)；Bax/Bcl-2基因比值增高，兩藥組對(duì)比單藥組、三藥組對(duì)比兩藥組均明顯增高（P＜0.01）。(5)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法顯示，Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)及Bax/Bcl-2比值增高，兩藥組對(duì)比單藥組、三藥組對(duì)比兩藥組均

5、明顯增高（P＜0.01或P＜0.05）；Bcl-2蛋白表達(dá)減弱，兩藥組對(duì)比單藥組、三藥組對(duì)比兩藥組均明顯降低（P＜0.01或P＜0.05）。(6)Westernbloting實(shí)驗(yàn)顯示：Bax蛋白表達(dá)及Bax/Bcl-2比值有增高趨勢(shì)，兩藥組對(duì)比單藥組、三藥組對(duì)比兩藥組均具有增高趨勢(shì)，Bcl-2蛋白表達(dá)無(wú)明顯趨勢(shì)。
　　 結(jié)論：人參皂苷Rg3、奧沙利鉑和索拉非尼單藥或聯(lián)合均具有抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖以及誘導(dǎo)其凋亡的作