無血清處理對甲狀腺癌TT細(xì)胞內(nèi)S100A13及FGF-1釋放機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：探討無血清處理對甲狀腺癌TT細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度（[Ca2+]i）變化及S100A13、FGF-1蛋白釋放的影響，初步闡明Ca2+在S100A13、FGF-1蛋白釋放過程中的作用。
　　方法：采用Western-Blot檢測無血清處理0h、1h、2h、4h、6h細(xì)胞內(nèi)S100A13及FGF-1蛋白表達(dá)量，ELISA檢測培養(yǎng)上清FGF-1蛋白濃度。應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測無血清處理TT細(xì)胞1h[Ca2+]i的變化。間接

2、免疫熒光觀察BAPTA-AM（2.5μmol/L）、EGTA（2.5mmol/L）對無血清處理6h細(xì)胞S100A13、FGF-1蛋白熒光分布的影響，Western-Blot檢測S100A13、FGF-1蛋白表達(dá)量，ELISA檢測培養(yǎng)上清FGF-1蛋白濃度。
　　結(jié)果：Western-Blot結(jié)果顯示無血清處理0h、1h、2h、4h、6h細(xì)胞S100A13、FGF-1蛋白表達(dá)量有逐漸下降趨勢，0h、1h、2h組間比較無明顯差異，4h

3、組細(xì)胞S100A13、FGF-1蛋白表達(dá)與0h、1h、2h三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），6h組細(xì)胞S100A13、FGF-1蛋白表達(dá)與0h、1h、2h、4h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。上述各時(shí)間處理組培養(yǎng)上清ELISA結(jié)果顯示，0h、1h、2h、4h、6h組細(xì)胞培養(yǎng)上清中FGF-1濃度有上升的趨勢，4h組與0h、1h、2h三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），6h組培養(yǎng)上清中FGF-1濃度較0h、1h、2h、4h

4、組明顯升高（P<0.01）。
　　激光共聚焦Ca2+熒光顯像結(jié)果顯示：正常培養(yǎng)的TT細(xì)胞[Ca2+]i約0.1～0.3μmol/L，在掃描期間較穩(wěn)定；無血清處理23min內(nèi)保持相對穩(wěn)定，23min后細(xì)胞[Ca2+]i迅速上升達(dá)到最大值1.6μmol/L，維持17min左右第40min緩慢下降至一個(gè)較低水平，第40min至第60min[Ca2+]i接近0.3～0.6μmol/L。1h內(nèi)細(xì)胞平均[Ca2+]i明顯高于正常培養(yǎng)組（P<0

5、.05）。EGTA、BAPTA-AM能明顯抑制無血清處理引起的細(xì)胞[Ca2+]i升高，平均[Ca2+]i與正常培養(yǎng)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　間接免疫熒光結(jié)果顯示無血清處理6h細(xì)胞內(nèi)S100A13、FGF-1蛋白熒光強(qiáng)度較正常培養(yǎng)組明顯減弱；EGTA、BAPTA-AM能拮抗無血清處理引起這兩種蛋白熒光變?nèi)?。Western-Blot結(jié)果顯示無血清處理6h細(xì)胞S100A13、FGF-1蛋白表達(dá)量較正常培養(yǎng)組明顯低，無血清處理同時(shí)加入EG