骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植治療肢體淋巴水腫的研究.pdf

1、目的：研究BMSCs移植對(duì)繼發(fā)性肢體淋巴水腫的治療，明確BMSCs移植治療肢體淋巴水腫的療效和影響療效的因素，探索肢體淋巴水腫治療的新方法。 方法： （1）手術(shù)和放射相結(jié)合法制作兔后肢淋巴水腫模型. （2）通過(guò)梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法獲取、分離、提純BMSCs，并進(jìn)行標(biāo)記和鑒定。 （3）BMSCs移植：肢體淋巴水腫形成后，將BMSCs和VEGF-C蛋白注射到兔后肢手術(shù)創(chuàng)傷并射線照射區(qū)域及水腫軟組織中，對(duì)照組

2、注射生理鹽水。 （4）檢測(cè)指標(biāo)：①肢體體積變化的測(cè)量，②微淋巴管計(jì)數(shù)，③免疫組化法檢測(cè)VEGF-C、flt-4，vWF等，④熒光定量RT-PCR檢測(cè)移植組織中Flt-4、VEGF-C及vWFmRNA的表達(dá)，⑤Western blot檢側(cè)Flt-4、VEGF-C及vWF蛋白。 （5）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理（SPSS10.0軟件）。 結(jié)果：成功制作了慢性肢體淋巴水腫的動(dòng)物模型，掌握了各個(gè)環(huán)節(jié)如淋巴管及淋巴結(jié)的切除、放療的劑量及范

3、圍、淋巴水腫模型制作過(guò)程中的觀察測(cè)量等的技巧。手術(shù)與放射相結(jié)合的方法制作慢性肢體淋巴水腫動(dòng)物模型是可行的，較可靠，本實(shí)驗(yàn)造模成功率在81％。肢體水腫體積的變化情況：各組肢體水腫體積比較，經(jīng)過(guò)方差分析，治療前，P>0.05；治療1周后，P>0.05，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療2周后，P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療3周后，P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療4周后，P<0.01，故可認(rèn)為各組總體均數(shù)不相等，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組

4、內(nèi)不同時(shí)間肢體水腫體積比較，A組治療前和治療后1周比較，P>0.05，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余不同時(shí)間比較，均為P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組治療前和治療后1周比較，P>0.05，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余不同時(shí)間比較，均為P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C組不同時(shí)間比較，均為P<0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；D組不同時(shí)間比較，均為P>0.05，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。微淋巴管計(jì)數(shù)：根據(jù)免疫組化法檢測(cè)Flt-4，對(duì)淋巴管染色，在光學(xué)顯微

5、鏡下計(jì)數(shù)微淋巴管數(shù)目，各組為淋巴管計(jì)數(shù)同一時(shí)間各組之間比較，治療后1周，B組和C組比較，P>0.05，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余各組間比較，均為P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后2周，B組和C組比較，P>0.05，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余各組間比較，均為P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：治療后3周，各組間比較，均為P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后4周，各組間比較，均為P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同一組內(nèi)不同時(shí)間比較

6、，P<0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。移植后28天熒光定量RT-PCR檢測(cè)移植組織中Flt-4、VEGF-C及vWFmRNA的表達(dá)：各組間比較，VEGF-C/GAPDH，P<0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；FLT-4/GAPDH，P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；vWF/GAPDH，P>0.05，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot檢側(cè)移植組織中Flt-4、VEGF-C及vWF蛋白的變化：各組間比較，經(jīng)過(guò)方差分析，VEGF-C/β-ac

7、tin，P<0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；FLT-4/β-actin，P<0.01，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；vWF/β-actin，P>0.05，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1、手術(shù)與放射相結(jié)合的方法制作慢性肢體淋巴水腫動(dòng)物模型是可行的，較可靠。 2、BMSCs移植可明顯增加新生淋巴管的生成，促進(jìn)淋巴回流網(wǎng)絡(luò)的重建，通暢淋巴引流，減輕甚至治愈肢體慢性淋巴水腫，對(duì)慢性肢體淋巴性水腫的療效較好，是有著較好前景的治療方法。