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文檔簡介
1、黃芪聯(lián)合生長因子誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)細胞的實驗研究
碩士研究生:杜盛陽
導師:吳學建
鄭州大學第一附屬醫(yī)院骨科
河南鄭州450052
摘要
目的
研究原代人臍帶間充質(zhì)干細胞(UCMSCs)的生物學特性及其體外向神經(jīng)細胞誘導分化的條件,為組織化人工神經(jīng)的制備提供干細胞資源。
方法:
本實驗中我們通過在無
2、菌條件下取正常足月剖腹產(chǎn)新生兒的臍帶,利用組織塊培養(yǎng)法獲得貼壁細胞并進行傳代培養(yǎng)和純化。取第2代貼壁細胞,免疫組化測定細胞表面CD44、CD105、CD106、CD34、CD45表達情況。取生長狀態(tài)良好的UCMSCs進行細胞爬片,待細胞生長至60%-70%融合時分為四組進行誘導分化。四組細胞分別加入單純培養(yǎng)液空白對照組(A組)、單純生長因子誘導組(B組)、單純黃芪誘導組(C組)和黃芪聯(lián)合生長因子誘導液(D組),倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)并檢
3、測其表面神經(jīng)細胞的標志物如NSE、NF和GFAP的陽性表達率,將結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。
結(jié)果:
1.原代培養(yǎng)的組織塊在5-6d后可見新生貼壁的細胞,形態(tài)類似成纖維細胞,一周后快速增殖,成漩渦狀聚集,在生長的過程中呈現(xiàn)問充質(zhì)干細胞的形態(tài)特點,免疫組化檢測表面標記CD44、CD105強陽性,CD106弱陽性,CD34、CD45陰性,檢測結(jié)果和UCMSCs的生物學特征符合。
2.單純bFGF、單純黃芪和
4、黃芪聯(lián)合生長因子都可以將細胞誘導向神經(jīng)樣細胞分化,但是通過誘導后細胞表面神經(jīng)標志物的測定,黃芪聯(lián)合生長因子誘導組的細胞NSE、NF和GFAP的陽性表達率也更高,經(jīng)統(tǒng)計學分析,兩者的差異明顯,具有統(tǒng)計學意義。
結(jié)論:
1.中藥黃芪聯(lián)合生長因子可明顯促進人UCMSCs分化為神經(jīng)樣細胞,不僅細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,而且從分子生物學水平表現(xiàn)出神經(jīng)細胞特征。
2.與單純生長因子誘導組(B組)和單純黃芪誘導組
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