CTP-β-gal融合蛋白在體內和體外的分布和動力學的研究.pdf

1、目的：胞漿轉導肽（cytoplasmic transduction peptide，CTP），作為一種生物載體，能為一些由于胞漿蛋白缺陷而致的疾病提供新的治療策略。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)CTP融合BCR/ABL寡聚化區(qū)域（oligomerization domain，OD）在慢性粒細胞白血病K562細胞中對BCR/ABL癌蛋白有靶向的治療作用。本課題擬通過評價CTP-β-gal融合蛋白在BaF3-P210細胞中的胞漿定位和酶活性能力，并測定

2、融合蛋白在小鼠體內的動力學和組織分布，以此來探討CTP-OD-HA融合蛋白在臨床運用的可行性。 方法：將lacZ、CTP基因依次插入到質粒pET32a（+），通過轉化、IPTG誘導融合蛋白CTP-β-gal表達，親和層析純化目的蛋白，最后Western blot鑒定純化后的目的蛋白。融合蛋白CTP-β-gal轉導BaF3-P210細胞，通過激光共聚焦顯微鏡、免疫組織化學分析和X-gal原位染色分析融合蛋白在細胞內的定位和活性能力

3、。體內通過尾靜脈注射雌性Balb/c小鼠，于注射后15min，1h，3h和24h收集肝臟、脾臟、腎臟、肺和腦組織。X-gal原位染色和定量酶活性分析檢測CTP-β-gal融合蛋白在各種組織中的分布情況。 結果：成功構建原核表達質粒pET32a（+）-CTP-lacZ，純化和Western blot鑒定了重組融合蛋白CTP-β-gal。激光共聚焦顯微鏡和免疫組織化學檢測分析發(fā)現(xiàn)融合蛋白CTP-β-gal在BaF3-P210細胞中有

4、很強的胞漿定位能力，且具有較高的酶活性能力。β-gal酶活性定量分析Balb/c小鼠各組織，發(fā)現(xiàn)CTP-β-gal融合蛋白酶活性在大多數(shù)組織中15min達高峰，僅腦組織是24h達高峰。 結論：本研究闡明了融合蛋白轉導BaF3-P210細胞和靜脈注射Balb/c小鼠后，CTP融合蛋白在細胞內的定位和酶活性能力以及在小鼠體內的動力學和組織分布情況，為CTP-OD-HA治療CML提供了合理的理論基礎，同時也為CTP融合蛋白胞漿轉導發(fā)揮