急性肺栓塞對(duì)腦鈉肽及C型利鈉肽受體影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、研究背景與目的
　　 肺栓塞(pulmonary embolism，PE)是臨床常見的一組疾病，由患者靜脈系統(tǒng)血栓或粥樣硬化斑塊、組織碎片或其他途徑進(jìn)入靜脈循環(huán)的腫瘤、脂肪、空氣等異物，導(dǎo)致部份肺動(dòng)脈及其分支阻塞而造成。依照病程發(fā)展又可分為急和慢性肺栓塞?；颊邥?huì)因呼吸困難而感到不適，可透過心電圖、抽血或放射影像來診斷。而腦利鈉肽(brainnatriuretic peptide，BNP)作為新的生物標(biāo)志物，作為上述診斷的補(bǔ)充

2、，也逐漸被用于PE的診斷及治療中。
　　 BNP具有利鈉、利尿、擴(kuò)血管作用，在抑制心肌肥厚、纖維化和抑制心肌細(xì)胞凋亡的終末器官活性也十分明顯。其釋放受到心肌細(xì)胞張力增強(qiáng)的刺激，與HF導(dǎo)致的心室功能障礙密切相關(guān)。在APE患者中，其血漿濃度明顯增加。然而一些研究表明，作為心血管系統(tǒng)的重要保護(hù)性激素之一，其高濃度卻未帶來與之相對(duì)應(yīng)的靶器官效應(yīng)，而表現(xiàn)出一種BNP缺乏或抵抗的一系列現(xiàn)象。
　　 C型利鈉肽受體(C-type na

3、triuretic peptide receptor，NPR-C)作為體內(nèi)腦利鈉肽激素的主要清除受體，近來受到越來越多的重視，在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及相應(yīng)在心血管疾病領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸深入起來，雖然其表達(dá)水平亦被發(fā)現(xiàn)受諸多因素的影響，但急性肺栓塞對(duì)其產(chǎn)生的一系列相應(yīng)影響目前尚不明確。結(jié)合BNP作為新的生物標(biāo)志物在APE后其濃度及功能方面的改變來看，其很可能與NPR-C受體有關(guān)，此相關(guān)性尚未引起相應(yīng)關(guān)注。
　　 本研究擬通過建立小鼠急性肺血栓

4、栓塞模型，觀察NPR-C在體內(nèi)主要表達(dá)器官的水平變化，通過測(cè)定BNP的濃度改變，檢測(cè)兩者之間的相關(guān)性，初步探討其表達(dá)調(diào)控的主要可能機(jī)制，并試圖進(jìn)一步詮釋體內(nèi)腦利鈉肽濃度升高的主要原因，為今后進(jìn)一步研究肺血栓栓塞癥的病理機(jī)制及篩選藥物奠定了基礎(chǔ)，并為臨床診斷與治療提供有益的思路。
　　 一、研究方法
　　 1、構(gòu)建并且改進(jìn)小鼠急性肺血栓栓塞癥模型，通過與全血血栓模型比較，建立更為穩(wěn)定的動(dòng)物模型。通過肺組織石蠟切片HE及PT

5、AH染色，BP及PAP檢測(cè)，TNF-α測(cè)量，評(píng)估及比較模型優(yōu)缺點(diǎn)。
　　 2、IHC檢測(cè)NPR-C的表達(dá)分布情況；通過Western blotting及real-time PCR技術(shù)分別檢測(cè)小鼠心、肺、腎的NPR-C蛋白及mRNA表達(dá)水平變化，心肌細(xì)胞BNP的mRNA表達(dá)水平變化；EIA法檢測(cè)小鼠血漿BNP濃度變化。
　　 3、ELISA法檢測(cè)肺栓塞小鼠內(nèi)皮素(endothelin-1，ET-1)及肌鈣蛋白1(cardi

6、actroponin I，cTnI)的水平變化。
　　 三、研究結(jié)果
　　 1、HE及PTAH染色證明小鼠肺血栓栓塞確實(shí)、可靠，栓子大多位于肺動(dòng)脈段或亞段水平。白色血栓栓塞組小鼠栓子24h、48h自溶率分別為5%、30%，全血血栓24h自溶率即已達(dá)100%。栓塞后小鼠血壓明顯下降，肺動(dòng)脈壓明顯升高，呼吸急促，術(shù)后活動(dòng)明顯減少。
　　 2、IHC染色提示NPR-C于肺廣泛表達(dá)，PE后其不同結(jié)構(gòu)間表達(dá)的密度梯度明顯改

7、變。
　　 3、Western blotting顯示NPR-C在心、肺含量明顯降低，腎未見明顯變化。
　　 4、RT-PCR證實(shí)BNP于肺、腎臟未見表達(dá)；Real-time PCR證實(shí)，mRNA水平NPR-C在心、肺表達(dá)明顯下調(diào)，腎臟未見明顯改變，心臟BNP mRNA表達(dá)明顯增加。
　　 5、血漿BNP濃度明顯，但增加幅度高于心臟BNP mRNA表達(dá)增加幅度。
　　 6、TNF-α與PE前后未見明顯改變，

8、僅見與手術(shù)操作相關(guān)的炎癥反應(yīng)；ET-1、cTnI升高明顯，但cTnI增加幅度更為明顯。
　　 四、研究結(jié)論
　　 1、小鼠肺白色血栓栓塞較以往模型栓溶明顯減弱，可靠性高，未見明顯由于異物栓子所引起的炎癥反應(yīng)，各項(xiàng)主要PE后表現(xiàn)符合實(shí)際，能更好的模擬APE這一病理生理過程，用于研究?jī)?yōu)越性明顯。
　　 2、APE后小鼠NPR-C表達(dá)下調(diào)，主要表現(xiàn)與心、肺。且肺組織內(nèi)NPR-C下調(diào)主要位于肺動(dòng)脈。BNP濃度的增加不單是