Profilin-1在AGEs誘導(dǎo)的大鼠心肌病變中的作用研究.pdf

1、背景：
　　糖尿病心肌病變(Diabetic cardiomyopathy，DCM)是糖尿病致死的主要并發(fā)癥。目前認(rèn)為DM的發(fā)生與發(fā)展主要與AGEs生成增多密切相關(guān)，AGEs可通過直接或間接通路引起氧化應(yīng)激，內(nèi)皮功能障礙，組織損傷與重構(gòu)等。研究發(fā)現(xiàn)AGEs/RAGE信號(hào)通路是最為重要的一條信號(hào)通路，推測(cè)其可能是防治DCM的重要治療靶點(diǎn)。在心血管組織中表達(dá)的profifin-1是關(guān)鍵的肌動(dòng)蛋白調(diào)節(jié)蛋白，可直接影響細(xì)胞骨架(cytos

2、keleton)的結(jié)構(gòu)，而研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的改變可能是心肌肥厚和心肌損傷的一個(gè)關(guān)鍵促進(jìn)因素;Rho/ROCK/profilin-1介導(dǎo)肌動(dòng)蛋白纖維的聚合，導(dǎo)致細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)重構(gòu)，推測(cè)該通路可能在DCM中起作用。目前未見profilin-1與DCM的相關(guān)研究。本研究擬建立AGEs誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷模型，觀察心肌組織形態(tài)和功能變化、心肌纖維化、心肌損傷及各種細(xì)胞因子的變化以及profilin-1的表達(dá);應(yīng)用shRNA腺病毒沉默PROFIL

3、IN-1基因表達(dá)技術(shù)，觀察干預(yù)后對(duì)AGEs誘導(dǎo)心肌病變的影響，直接論證profilin-1在AGEs誘導(dǎo)的心肌損傷中的關(guān)鍵作用;探尋糖尿病心肌病變的防治靶點(diǎn)，為開發(fā)和研制新藥提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　配制AGEs;構(gòu)建沉默PROFILIN-1基因shRNA腺病毒載體。將SD大鼠隨機(jī)分組:正常對(duì)照組（control組）:連續(xù)尾靜脈注射生理鹽水;AGEs組:連續(xù)尾靜脈注射AGEs(25mg/kg);AGEs+shProfi

4、lin-1組:間斷心尖注射PFN1 shRNA及連續(xù)尾靜脈注射AGEs(25mg/kg);空病毒組（empty virus control組）:間斷心尖注射無處理的載體腺病毒。8周后行心電圖檢查，觀察心電圖變化，快速測(cè)糖法測(cè)量空腹血糖;處死大鼠取血清測(cè)ICAM-1、ADMA、MDA水平;取心肌組織行HE染色觀察心肌病變;心肌免疫組化觀察profilin-1蛋白表達(dá)情況;提取心肌蛋白并通過Western Blot檢測(cè)profilin-1、

5、Rho、NF-κB蛋白表達(dá)情況;提取心肌組織RNA并通過RT-PCR檢測(cè)profilin-1mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　(1) PFN1 shRNA干擾腺病毒的細(xì)胞感染效率驗(yàn)證結(jié)果示腺病毒載體構(gòu)建成功。(2)心電圖示AGEs組T波下降幅度與control組明顯增大，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。(3)心肌組織HE染色顯示(400×):相較于control組，AGEs組心肌細(xì)

6、胞排列紊亂，胞質(zhì)渾濁;胞核增大，核深染，部分心肌細(xì)胞出現(xiàn)核邊集;心肌間質(zhì)纖維增多，排列紊亂，細(xì)胞間隙充盈，可見炎性細(xì)胞浸潤。shProfilin-1組同AGEs組比較細(xì)胞排列較規(guī)律，無明顯水腫，胞核清晰，心肌間質(zhì)無明顯增生及炎性細(xì)胞浸潤。(4)心肌免疫組化(400×)示AGEs組與對(duì)照組相比，profilin-1高表達(dá)，P＜0.01;shProfilin-1組與AGEs組相比，profilin-1明顯下調(diào)，P＜0.01(5)AGEs組與

7、正常對(duì)照組相比，Profilin-1、Rho、NF-κB表達(dá)顯著增加;shProfilin-1組與AGEs組相比，Profilin-1、Rho、NF-κB表達(dá)量顯著減少，各項(xiàng)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05(6)AGEs組與正常對(duì)照組相比，Profilin-1 mRNA、MMP-2 mRNA在心肌中的表達(dá)顯著增加，分別為P＜0.01，P＜0.05;shProfilin-1組與AGEs組相比Profilin-1 mRNA、MMP-2 mR

8、NA在心肌中的表達(dá)顯著減少;分別為P＜0.01，P＜0.05;MMP-9 mRNA的表達(dá)各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05(7)AGEs組與正常對(duì)照組相比，血清ICAM-1、ADMA、MDA的表達(dá)顯著增加，P＜0.05;shProfilin-1組與AGEs組相比血清ICAM-1、ADMA、MDA的表達(dá)顯著減少，P＜0.05。
　　結(jié)論：
　　(1) Profilin-1介導(dǎo)了AGEs誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷及重構(gòu);其機(jī)制涉及心肌細(xì)胞