球形脂聯(lián)素對2型糖尿病大鼠心肌病變的保護作用研究.pdf

1、目的：通過觀察球形脂聯(lián)素（globular adiponectin, gAd）對2型糖尿?。═2DM）大鼠心肌細胞凋亡和心肌組織中TGF-β1/smads信號通路的影響，探究gAd對糖尿病心肌病變的保護作用及其可能機制。
　　方法：30只SPF級雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為普通對照組（NC組，n=8），造模組（n=22）。NC組給予一般飼料喂養(yǎng)，造模組飼以高脂高糖料。8周后，禁食12小時，造模組予以一次性3

2、0mg/kg的小劑量STZ腹腔注射，NC組予以同等劑量的枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射。72小時后血糖儀測尾靜脈隨機血糖≥16.7mmol/L,且出現(xiàn)多尿、多飲、多食、精神萎靡等現(xiàn)象即T2DM造模成功。繼續(xù)原飼料喂養(yǎng)大鼠12周，12周末檢測大鼠尾靜脈血糖，去除死亡及血糖恢復(fù)的大鼠，最終19只大鼠成為DCM模型。DCM模型組大鼠隨機分為gAd干預(yù)組（DA組，n=10），糖尿病心肌病組（DCM組，n=9）。DA組大鼠每日腹腔注射gAd10ug/kg

3、，DCM組和NC組大鼠每日腹腔注射同等劑量生理鹽水。藥物干預(yù)8周末，各組分別取8只大鼠進行后續(xù)實驗。心臟超聲評價大鼠心功能，腹主動脈采血檢測相關(guān)生化指標(biāo)，稱心臟重量計算大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)，心尖相同部位取心肌，TUNEL染色觀察心肌細胞凋亡，HE染色觀察心肌組織大體形態(tài)，免疫組化法測定相關(guān)指標(biāo)蛋白表達，實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法測定心肌組織中 smad3、smad7、TGF-β1mRNA含量，蛋白免疫印跡（Western b

4、lot）法檢測心肌組織中smad3、smad7、TGF-β1蛋白表達。
　　結(jié)果：⑴大鼠空腹血糖結(jié)果顯示：DCM組血糖值（23.58±2.74）較NC組（4.61±0.66）增高（P<0.05），DA組血糖值（19.48±1.49）較DCM組（23.58±2.74）有所下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；⑵心臟質(zhì)量指數(shù)統(tǒng)計結(jié)果顯示：DCM組（3.20±0.21)較NC(2.56±0.22）組增高（P<0.05），DA組（2.

5、82±0.39）較DCM組減?。≒<0.05）。⑶心功能：與NC組相比DCM組大鼠心功能明顯下降，gAd干預(yù)后，DA組大鼠心功能好轉(zhuǎn)；⑷TUNEL染色結(jié)果顯示：DCM組大鼠心肌細胞凋亡指數(shù)較 NC組高（P<0.05），DA組大鼠心肌細胞凋亡指數(shù)較DCM組減?。≒<0.05）；⑸HE染色觀察心肌組織形態(tài)：光鏡下可見NC組大鼠心肌細胞形態(tài)正常，胞核排列整齊；DCM組大鼠細胞大小不一，形態(tài)紊亂，核成多形性，細胞間質(zhì)增多，心肌細胞有斷裂現(xiàn)象；D

6、A組大鼠心肌細胞有病態(tài)改變，但較DCM組減輕；⑹相關(guān)指標(biāo)免疫組化分析結(jié)果：Ⅰ型膠原蛋白在NC組心肌細胞間質(zhì)中未見明顯表達，在DCM組心肌間質(zhì)中表達較多，呈條索狀，在DA組心肌間質(zhì)中表達較DCM組減少，成散在分布表達。平均灰度值為NC組（183.67±9.50）vs DCM組（164.00±4.00）（P<0.05），DCM組（164.00±4.00） vs DA組（176.14±7.34）（P<0.05）。TGF-β1在NC組細胞胞漿中

7、分布很少，胞漿淡染，未見明顯表達；在DCM組胞漿中分布廣泛，呈強陽性表達；在DA組胞漿中染色較淡，呈弱陽性表達。平均灰度值為NC組（210.00±6.20) vs DCM組(182.80±5.63)（P<0.05），DCM組(182.80±5.63)vs DA組（200.50±4.51）（P<0.05）。Smad3在NC組細胞中表達較少，在DCM組細胞中呈現(xiàn)片狀強陽性表達，在DA組細胞胞漿中弱陽性表達；平均灰度值為NC組（205.33±

8、4.73) vs DCM組(190.25±6.34)（P<0.05）， DCM組(190.25±6.34) vs DA組（199.83±4.62）（P<0.05）。Smad7在NC組細胞胞漿中呈現(xiàn)強陽性表達，在DCM組細胞中少量表達，在DA組細胞中表達較DCM組增多，但較NC組弱。平均灰度值為NC組（182.60±11.39) vs DCM組(207.40±3.13）（P<0.05），DCM組(207.40±3.13）vs DA組（18

9、8.75±8.54）（P<0.05）。⑺RT-PCR結(jié)果顯示：心肌組織中TGF-β1、smad3mRNA含量與NC組相比，DCM組含量增多（P<0.05），gAd干預(yù)8周后，DA組含量較DCM組減少（P<0.05）。Smad7mRNA含量DCM組較NC組減少（P<0.05），藥物干預(yù)8周后，DA組含量較DCM組增多（P<0.05）。⑻Western blot結(jié)果顯示：心肌組織中TGF-β1和smad3蛋白含量在DCM組均較NC組表達增加