宮頸鱗癌組織轉(zhuǎn)移相關(guān)基因篩查的初步研究.pdf

1、目的:
　　 應(yīng)用基因芯片檢測盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無轉(zhuǎn)移組宮頸鱗癌組織中差異表達(dá)基因，從中篩選轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，為預(yù)測宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移提供有用的分子標(biāo)志物，為闡明宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制提供線索。
　　 方法:
　　 1.收集在我院行廣泛子宮切除+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)的宮頸鱗癌患者癌組織標(biāo)本，其中盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組4例，無轉(zhuǎn)移組6例。
　　 2.抽提各宮頸鱗癌組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，利用羅氏NimbleGen全基因組

2、表達(dá)譜芯片篩選盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及無轉(zhuǎn)移組差異表達(dá)基因，得出兩組差異表達(dá)基因譜。
　　 3.從差異表達(dá)基因譜中選取6個(gè)基因，在盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及無轉(zhuǎn)移組宮頸鱗癌組織中進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測，以公式2-△△Ct=2-△Ct轉(zhuǎn)移組/2-△Ct無轉(zhuǎn)移組計(jì)算各基因表達(dá)差異倍數(shù)，與基因芯片結(jié)果對比，以評估基因芯片準(zhǔn)確性。
　　 4.通過基因庫檢索及PUBMED文獻(xiàn)搜索結(jié)合GO(gene ontology)分類，從差異表達(dá)基因譜中

3、篩選出與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。
　　 結(jié)果:
　　 1.差異基因篩選:通過基因芯片在盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及無轉(zhuǎn)移組宮頸鱗癌組織中篩選出表達(dá)差異明顯的基因329個(gè)，其中在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組宮頸鱗癌組織中相對于無轉(zhuǎn)移組上調(diào)基因有187個(gè)，下調(diào)基因有142個(gè)。
　　 2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證結(jié)果:在兩組宮頸鱗癌組織基因芯片篩選出的差異表達(dá)基因中，選取KLK6、FGA、CTGF、CPB2、PRL1及CCL20進(jìn)一步行實(shí)時(shí)熒光定量PC

4、R檢測，計(jì)算出差異表達(dá)倍數(shù)，在盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中分別為上調(diào)2.7014倍、11.7411倍、3.4248倍、12.1232倍、4.4272及下調(diào)12.7065倍。這些基因的差異表達(dá)趨勢與基因芯片結(jié)果一致。
　　 3.篩選腫瘤相關(guān)基因:通過基因庫及PUBMED文獻(xiàn)檢索各基因功能并結(jié)合GO分類，從差異表達(dá)基因中篩選出與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因共44個(gè)，其中在盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組宮頸鱗癌組織中上調(diào)的基因29個(gè)，下調(diào)的基因15個(gè)。