先天性巨結(jié)腸術(shù)中NADPH-d法快速冰凍病理診斷的研究.pdf

1、目的
　　先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung'sdiseaseHD)又稱腸無(wú)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥(Aganglionosis)，該病是小兒消化道畸形的常見(jiàn)病。HD的病理改變是病變腸壁內(nèi)粘膜下層及肌層內(nèi)缺乏神經(jīng)叢或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞導(dǎo)致病變腸段無(wú)法松弛和失去正常蠕動(dòng)，使病變腸段始終處于痙攣狀態(tài)，不能正常地將病變近端腸內(nèi)容排入病變腸段中，臨床上表現(xiàn)為腹脹、頑固性便秘，嚴(yán)重影響生長(zhǎng)發(fā)育。
　　手術(shù)切除HD病變腸管是根治該病的方法，其術(shù)后效果主

2、要決定病變腸管的徹底切除，因此術(shù)中正確的病變腸管判定至關(guān)重要，傳統(tǒng)術(shù)中診斷方法為冰凍切片行HE染色，這種方法其時(shí)間大約在30分鐘左右，而且這種方法對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的辨認(rèn)需要有資深經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生來(lái)診斷，一些病例因此術(shù)中需做多次冰凍切片才能做出病理診斷，耗時(shí)更長(zhǎng)，而且冰凍HE染色與石蠟HE染色不能達(dá)到100％的符合。有些病例因此導(dǎo)致切除不充分而需二次或多次手術(shù)。給患兒造成巨大損害，也容易導(dǎo)致醫(yī)療糾紛。NADPH-d冰凍切片染色法是一種較快的神經(jīng)

3、節(jié)細(xì)胞染色法，對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有特異呈色，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的顯染后易于辨認(rèn)。本研究利用NADPH-d冰凍切片染色法應(yīng)用于巨結(jié)腸的術(shù)中冰凍切片染色行術(shù)中快速病理診斷并于傳統(tǒng)冰凍HE染色進(jìn)行比較研究，分析NADPH-d冰凍切片染色法在巨結(jié)腸術(shù)中快速病理診斷的作用和特點(diǎn)，為尋找更加快速及準(zhǔn)確的巨結(jié)腸術(shù)中診斷方法提供新的途徑。
　　方法
　　一、標(biāo)本與分組
　　60例經(jīng)石蠟切片HE染色病理確診的先天性巨結(jié)腸患兒的術(shù)中切除腸管包括痙攣段、

4、正常段腸管（來(lái)源于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院新生兒外科，并獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)認(rèn)可[no.2012PS80K]），全部標(biāo)本術(shù)中均行冰凍HE染色，應(yīng)用盲法將標(biāo)本行NADPH-d冰凍切片染色。
　　二、實(shí)驗(yàn)試劑
　　0.1mol/LPB(pH=8.0);NADPH-d(Simga);
　　NBT(Simga);二甲基亞砜;
　　Triton(X)-100
　　三、實(shí)驗(yàn)方法
　　患兒術(shù)后石蠟切片HE染色病理檢查診斷

5、為最終診斷標(biāo)準(zhǔn)，分別用NADPH-d快速染色法與傳統(tǒng)冰凍切片HE快速染色法進(jìn)行比較研究，統(tǒng)計(jì)診斷時(shí)間，診斷率，分析前者的特點(diǎn)，兩種不同處理組間比較采用配對(duì)x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，再隨機(jī)取NADPH-d染色片子（正常段）進(jìn)行HE染色（雙重染色）。
　　結(jié)果
　　本組60例病例中NADPH-d染色正常腸段陽(yáng)性57例，陰性3例，全部痙攣腸段無(wú)陽(yáng)性結(jié)果;冰凍HE染色下常腸管全部為陽(yáng)性結(jié)果，痙攣段腸管全部為陰性結(jié)果

6、。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩種方法陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。經(jīng)計(jì)算NADPH-d染色染色時(shí)間為15分鐘，明顯小于冰凍HE染色時(shí)間（30分鐘），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞在NADPH-d冰凍切片呈紫色胞漿，核呈空泡狀容易確認(rèn)。
　　結(jié)論
　　1、快速冰凍NADPH-d染色法可應(yīng)用于巨結(jié)腸術(shù)中快速病理診斷，結(jié)果可靠。
　　2、冰凍NADPH-d染色法可用于巨結(jié)腸術(shù)中判定正常腸管的界定且可信。
　　3、