人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞二者成血管作用的研究.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)將人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞二者在體外培養(yǎng)，選擇生長(zhǎng)傳代數(shù)適當(dāng)?shù)膬煞N細(xì)胞后分別予以熒光蛋白標(biāo)記，按一定的細(xì)胞比例與I型鼠尾膠原/纖維蛋白混合培養(yǎng)，激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察兩種細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化及相互聯(lián)系，計(jì)算不同細(xì)胞比例下生成的類血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的長(zhǎng)度，研究不同細(xì)胞比率下成血管網(wǎng)的趨勢(shì)及探討血管化種子細(xì)胞的最佳比率，為研究后期血管化種子細(xì)胞與骨組織材料支架復(fù)合奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　(1)體

2、外培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、成骨成脂誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)、免疫組織化學(xué)鑒定，確定細(xì)胞性質(zhì)。
　　(2)慢病毒攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染標(biāo)記人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，慢病毒攜帶紅色熒光蛋白轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，研究轉(zhuǎn)染率最大化時(shí)病毒滴度及最佳復(fù)感染指數(shù)值（MOI）。
　?。?）制備I型鼠尾膠原/纖維蛋白。
　　（4）培養(yǎng)箱孵育后第1、5、9天激光共聚焦掃描顯微鏡下觀

3、察在鼠尾膠原/人纖維蛋白支架中的類血管狀結(jié)構(gòu)的生成。
　　（5）利用MetaXpress軟件系統(tǒng)中血管生成分析模塊（Angiogenesis）分析比較4種不同細(xì)胞比例下生成的類血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的長(zhǎng)度值。
　　（6）利用DNA萃取法分析I型鼠尾膠原/纖維蛋白支架中最佳細(xì)胞比例下細(xì)胞的活力與增殖水平。
　　結(jié)果:
　　熒光標(biāo)記后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞激光共聚焦掃描顯微鏡下第1、5、9天連續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)在形態(tài)上